胚胎操作中的注意事项

实验概要

在胚胎学实验中，取卵与移植是很关键而重要的步骤，本Protocol的目的是向广大的实验人员提供一些心得体会，以利于大家以后的研究工作。

实验步骤

1.取卵原则：

1)   尽量缩短体外操作的时间——缩短杀鼠时间；取卵巢时无需放入去核液滴中，以加快操作速度；

2)   尽量减少操作中对卵的损伤——准备多根粗细不同的口吸管进行消化；据酶的浓度及活力，将消化时间固定在最适值；为防止操作液渗透压的改变，在使用之前盖上皿盖。

2.取卵后，将卵放入培养箱中培育15min，再进行显微操作。（刚从输卵管中取出并处理过的乱较脆弱。）

3.将卵或胚胎移入不同液体中时,应提前吸入一段欲移入的液体再移出卵，待将卵移入新滴后可见对流的出现，应及时将带入的液体吸出，以维持液滴的成分及渗透压。

4.胚胎移植：

原则：由于输卵管/子宫处于可自我调节的内环境中，相较之下，对胚胎的保护意识应更甚于输卵管/子宫。

1)   在固定好输卵管/子宫的位置之后，再从培养箱中取出胚胎，尽量缩短其在操作液中的时间；

2)   用于清洗胚胎的操作液滴量为1m L （有利于减少蒸发引起的渗透压改变）；

3)   清洗胚胎时，注意上述第3点，以维持操作环境不变。

4)   提前准备两套口吸管，一套用于将卵从培养滴中移入操作液中，另一套用于将胚胎移入输卵管/子宫（此套必须保证清洁，避免移植时胚胎在管中堵塞）。

5.注意石蜡油的存放，若出现气味异常应及时更换。