脂肪源干细胞的培养

（1）吸脂术时用无菌针管从臀上方吸取深层脂肪组织20 mL。

（2） 在1 h内将其移至离心管内，加入等量PBS缓冲液，充分振荡后低速离心800 r/min×10 min。

（3）反复冲洗3次后加入等量15 g/L I型胶原酶，37℃水浴中充分振荡30 min，再加入等量胎牛血清（FBS）中止。

（4）低速离心10 min后弃去上清. 将下层细胞用PBS悬浮后加入16 mmol/L NH4Cl 37℃水浴中10 min以裂解红细胞. 低速离心10 min后再用PBS冲洗3次. 最后将细胞用含100 mL/L FBS+10 g/L青霉素的DMEM悬浮后移入培养瓶中，37℃，50 mL/L CO2培养箱中孵育。

（5）48 h后首次换液，弃去悬浮细胞. 随后每3天换液，1周后传代. 将第3代细胞用于流式细胞仪检测. 浓集细胞到109/L 后进行流式细胞仪检测。

（6）细胞传至第3代时将其以2×107/L的细胞数分别转入各定向培养基中进行培养. 诱导培养2周后，对成脂诱导组进行油红Ｏ脂肪颗粒染色。

现在脂肪干细胞缺乏特异的表面标志鉴定，各类文献提到脂肪干细胞表达阳性的标志物有：cd13，cd29，cd59，cd49e，cd73，cd90，HLA-ABC等。但表达阳性不代表具有特异性，所以要从标志物上鉴定脂肪干细胞还是很困难的，应该说不具有很强的说服能力。

按文献所说的步骤来提取脂肪干细胞，形态类似干细胞，并且具有多向分化的能力，这就足以说明提取的细胞是干细胞。