脐带血干细胞的准备

试剂和材料：
1. 运输培养基：Eagle基础培养基（EBM），添加300U/ml青霉素和300μg/ml链霉素，150μg/ml庆大霉素和1μg/ml两性霉素B；
2. 夹子；
3. 剪刀；
4. 抗凝剂：CPDA-1：122mmol/L（26g/L）枸橼酸钠，0.142mol/L（25.5g/L）葡萄糖，15.6 mmol/L（3.0g/L）枸橼酸和18.3 mmol/L（2.2g/L）磷酸二氢钠；
5. Betadine﹡或70%乙醇；
6. 18号注射器针头；
7. 脐带收集袋，175ml，含24.5ml CPDA-1；
8. 50ml注射器，含200I.U.肝素

实验方法：
1. 出生后，用两个夹子在近新生儿的末端和近胎盘的末端夹住脐带以封闭脐带；
2. 剪下两个夹子间的脐带，一端在接近新生儿处，另一端剪去胎盘；
3. 剪下脐带后放入运输培养基中送去实验室，整个处理过程在6-12h内；
4. 用Betadine或70%酒精的棉花擦拭针头插入位点，位点在脐带近胎儿末端；
5. 为了收集到最大量的脐血，脐带的处理动作要尽可能小；
6. 接着用收集袋或50ml注射器的针头插入步骤2中处理好的脐静脉插入位点；
7. 将收集袋保持在低于插入位点的水平，以利于脐血在重力作用下流入容器中，或者用50ml注射器缓慢地将脐血从脐静脉内抽出。尽可能多地收集脐血，一般能收集到60-150ml；
8. 如果出现静脉滑脱，可沿脐带稍上处用Betadine或70%酒精消毒后重新插入针头；
9. 血流停止后，打开针头安全帽，将它推入锁定位置。注意：脐血应该保存于室温，不要冷藏；
10. 如果使用袋装，用附带的卡环夹住管子，尽可能接近血袋处打两个安全结以防止泄露，然后剪去针头，将针头放入尖头容器中丢弃；
11. 轻轻转动血袋或注射器几次，使脐血与抗凝剂充分混合；