脲酶的测定实验——光度计测定法

脲酶

磷酸钾脲ADPNADHα-酮戊二酸谷氨酸脱氢酶脲酶

分光光度计

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.98 ml 实验混合物

0.02 ml 脲酶

25℃、340 nm 处吸收值降低，ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

试剂：

0.1 mol/L 磷酸钾，pH 7.6

2.0 mol/L 脲（Mr＝60.0；12 g 溶于 100 ml 0.1 mol/L 磷酸钾，pH 7.6）

25 mmol/L ADP（二钠盐，Mr＝471.2；118 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾，pH 7.6）

10 mmol/L NADH（二钠盐，Mr＝709.4；71 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾，pH7.6）

0.1 mol/L α-酮戊二酸（单钠盐，Mr＝168.1；168 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾，pH 7.6）来源于牛肝脏的谷氨酸脱氢酶（GluDH，500 U/ml 在 0.1 mol/L 磷酸钾中，pH 7.6）

脲酶（大约 1 mg/ml，使用前用 0.1 mol/L 磷酸钾、pH 7.6 溶液稀释至约 0.1 U/ml）