色谱柱的关键内容是制备出高效的填料,这些填料制成的色谱柱既要有好的选择性,又要有高的柱效,要提高柱效是现代高效液相色谱的又一关键问题。
但是色谱填料的选择范围很宽,有聚合物基质填料、硅胶基质填料和其它无机填料。所以要选择合适的色谱填料,必须对此有一定的认识和了解。
色谱柱填料应该如何选择和装填?咱们细细来讲。
1、硅胶基质填料
硅胶是HPLC填料普遍常用的基质。除了具有无机物基质共有的高强度,还提供了一个良好得表面,可以通过成熟的硅烷化技术键合范围很广的配基,制成反相、离子交换、疏水作用、亲水作用或分子排阻填料。硅胶基质填料适用广泛的溶剂,从极性到非极性。其缺点是在水溶性碱性流动相中不稳定。通常,硅胶基质的填料推荐的常规分析pH范围为2~8。
2、聚合物填料
聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等,其优点是在PH值为1~14均可使用。相对于硅胶基质的C18填料,这类填料具有较强的疏水性,而且大孔的聚合物对蛋白质等样品的分离非常有效。其缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低。
3、其他无机填料
其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的用途。
如石墨化碳黑正逐渐成为反向色谱柱填料。这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性。该柱填料一般比烷基键合相硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强。石墨化碳可用于分离某些几何异构体,由于在HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可以用于HPLC。氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可以在pH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物的作用也很强,应用范围受到一定限制,所以未能广泛应用。
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