反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇（或乙腈）/水中的。请一定确保您所使用的活动相和甲醇（或乙腈）/水互溶，由于色谱柱在运输过程中可能会干掉，因此在用活动相分析样品之前，应使用分10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱。
假如您所使用的活动相中含有缓冲盐，应留意用含水量很高（约95%）的活动相过渡，样品分析完后，冲洗柱子是亦然。过往传统的方法使用纯水冲洗，对于非极性柱，如C8或C18，由于纯水不能浸润填料表面而冲倒碳链，造成柱效下降。
另外，分析样品时，由于纯水在填料表面不能浸润形成水膜，出现样品不保存而分不开，重现性差，所以对于一般的C18或C8，有机溶剂不能低于5%。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。假如该色谱柱需要使用含水或甲醇或乙腈的活动相，请在使用活动相之前用乙醇或异丙醇平衡。
色谱柱在平衡过程中，将流速缓慢地进步用活动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂浓度假如较低，则需要较长的时间平衡）。
色谱柱的再生：
建议用来冲洗的溶剂体积
色谱柱规格 柱体积 溶剂体积
150×4.6 2.50ml 50ml
250×4.6 5.0ml 100ml
250×10 20ml 400ml
请根据下表选择您的再生方法：
极性固定相(如Si，NH2，Diol色谱填料)的再生：正庚烷-氯仿-乙酸乙酯-丙酮-乙醇-水
非极性固定相（如反向填料C18，C8等）的再生：水-乙腈-氯仿（或异丙醇）-乙腈-水
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