苹果酸脱氢酶测定实验

L-苹果酸：NAD 氧化还原酶，MDH。

L-苹果酸 ＋ NAD＋⇌ 草酰乙酸 ＋ NADH ＋ H＋

实验首选逆反应。

MDH 稀释溶液

磷酸钾 NADH 草酰乙酸

分光光度计

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.98 ml 实验混合物

0.02 ml MDH 稀释溶液

25℃ 时，于 340 nm 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

试剂

0.1 mol/l 磷酸钾，pH 7.5

0.01 mol/l NADH（71 mg 溶于 10 ml H₂O）

0.1 mol/l 草酰乙酸（Mr＝132.1，132 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/l 磷酸钾，pH 7.5 中）

MDH 原料溶液（例如 10 mg/ml，用 0.1 mol/l 磷酸钾 pH7.5 稀释至 1 IU/ml）