茚三酮显色反应的影响因素分析概述

　　茚三酮与谷氨酸的显色反应灵敏度较高 ,但同时也受到多种因素的影响。

　　当实验条件控制不好时 ,会造成实验数据的较大偏离 ,从而产生较大的误差。此显色反应的影响因素主要有以下几方面。 

　　1、谷氨酸浓度的影响

　　实验表明 ,谷氨酸与茚三酮水溶液在表 3所注条件下反应的最低显色浓度为70μg/ mL 。随谷氨酸浓度变大 ,显色逐渐变深。当浓度大于 140μg/ mL 时 ,所显颜色过深且其光密度值超出量程。当谷氨酸浓度在 80～140μg/ mL时 ,颜色变化明显且显色较稳定。

　　2、pH 值的影响

　　以 100μg/ mL 的谷氨酸标准液在不同pH下进行显色反应。显色反应随 pH的不同颜色有明显的变化。当 pH在 4 以下时不显色 ,而 pH 在 6～10 时 ,颜色变化明显。但因茚三酮的水溶液在碱性条件下溶液本身带有明显的淡黄色 ,因此 pH选定在 6 左右较好 ,此时基本无颜色干扰且显色稳定。

　　3、温度及反应时间的影响

　　实验表明 ,温度和反应时间对此显色反应的影响也很大。以 100μg/ mL 的谷氨酸标准液在 70 ℃进行显色发应时 ,发现即使加热30 min 也基本无颜色变化。当温度为 80 ℃时 ,加热 30 min 以上有颜色变化 ,而当温度为 90 ℃时 ,加热 15 min 左右即有明显的颜色变化 ,沸水加热时颜色变化也很明显。但考虑到蒸发的影响 ,所以实验选用 90 ℃作为最佳反应温度。在显色反应中 ,反应时间主要根据具体的颜色变化而定。一般来说 ,当谷氨酸浓度在 80～140μg/ mL 时 ,90 ℃加热 20 min 以上即可完全反应。时间太短 ,反应不完全 ,颜色梯度不明显 , 所以最佳反应时间在 20 ～25 min。