发布时间:2019-06-24 17:24 原文链接: 荧光光定量PCR结果的分析方法

荧光PCR的分析方法对荧光定量PCR结果的分析方法我们分为两种:绝对定量分析法和相对定量分析法。

1、绝对定量分析方法,起始浓度的对数跟循环数的线性关系,标准曲线由已知拷贝数的标准品绘制,根据样品的Ct值,可求样品的模板量。

(1)标准品的制备:

1V的样品原液(i)+9V稀释缓冲液,得到ii;

1V的ii +9V稀释缓冲液,得到iii;

1V的iii + 9V稀释缓冲液,得到iv;

1V的iv +9V稀释缓冲液,得到v。

(2)拷贝数的计算:待测样本浓度(ng/ul)=OD260×40*稀释倍数

样品分子量+碱基数×324

待测样本拷贝数=待测样本浓度/样本分子量×6×1014

从扩增数据得到循环数,通过标准曲线,我们可以求出样品的拷贝数。

2.相对定量分析方法:

其又可有双标准曲线法和双Ct法。所谓相对,就只是实验前后结果的对比,反映了反应前后的数据的差值。

(1)双标准曲线法,分析简单,但是对于每一个基因,每一轮实验都需要做标准曲线,而且必须有特定的标准品作标准曲线,这样的标准品不代表样品扩增的真实状态。这种方法常用于基因表达调控。

F=待测样品目的基因浓度/待测样品参照基因浓度÷对照样品目的基因浓度/对照样品参照基因浓度

(2)双Ct法,此方法不用对看家基因和目的基因做标准曲线,而只需要对待测样品分别进行PCR扩增即可,标准曲线的差值<0.1.假若扩增效率为100%或标准曲线及每次扩增之间的效率都保持一致,这样实验条件优化较难为复杂。这种分析方法较长用于基因表达调控研究中。


相关文章

萤火牵牛花来了,发光植物首次进入美国市场

现在,美国的消费者可以预订一种持续发光的基因工程植物了。美国48个州的居民只需花29美元就可以得到一株能持续发出淡淡绿色光芒的矮牵牛。美国生物技术公司LightBio将于4月份开始运送一批5万株“萤火......

160.95万元农业农村部规划设计研究院一项中标结果公布

近日,农业农村部规划设计研究院谷物烘干与储藏技术集成科研基地建设项目06包中标结果公布,本次中标项目包括荧光分光光度计、流变仪、元素分析系统、食品氧化性测定仪、气相色谱质谱联用仪,中标金额共160.9......

朱令走完了抗争的一生,火焰原子荧光揭开“铊”这种神秘毒药的面纱

朱令案是一个持续关注并报道的案件,触动了很多人良知。上个月,朱令因脑瘤而生命垂危,她的父亲表示她很危险,医生曾宣判她可能活不过10月,但她挺进到了12月22日,24日中午12时,朱令遗体告别仪式在北京......

“荧光”,让锂电更加光彩绚烂!

1荧光基础知识简介什么是荧光?当物质分子吸收光子能量而被激发,然后从激发态的最低振动能级返回到基态能级时所发射出来的光即为荧光(fluorescence)。分子荧光光谱法,又称为荧光光谱法或荧光分析法......

《荧光酶标分析仪校准规范》等征求意见通知

近日,全国生物计量技术委员会发布了《荧光酶标分析仪校准规范》及《碘含量分析仪校准规范》征求意见的通知,征求意见稿的相关材料在下列附件中。请大家认真评阅审议后填写征求意见表反馈到委员会秘书处或相关起草小......

重磅!微型高精度集成钻石量子电流传感器研制出

电动汽车、智能电网、高速列车等新兴工业应用的快速发展,对高精度的电流传感器提出了更高要求。与传统电流传感器相比,基于量子效应的传感装置可以利用量子态操控技术来提高测量的精度。这些优势使得基于量子效应的......

日立推出新型能量色散X射线荧光分析仪EA1280

新品发布日立分析仪器(上海)有限公司于2023年6月宣布推出EA1280,这是一款用于在中国测量环境有害物质的新型能量色散X射线荧光分析仪。近年来,限制使用环境有害物质已变得普遍,且成为保护环境工作的......

生物传感及光谱成像(上):深究机理单分子检测成趋势

    2023年7月16日,第22届全国分子光谱学术会议暨2023年光谱年会召开的第二天,在生物传感及光谱成像专场的上午半场,专家们带来单分子检测、生物酶传感......

改变疫苗分配的游戏规则

将疫苗送到需要它们的人手中并不总是那么容易。许多疫苗需要冷藏,因此很难将它们运送到没有必要基础设施的偏远地区。麻省理工学院的研究人员为这个问题提出了一个可能的解决方案:一种移动的疫苗打印机,可以按比例......

新型荧光传感器阵列应用于淀粉样蛋白聚集检测

近日,中国科学院大连化学物理研究所研究员徐兆超团队和新加坡科技设计大学刘晓刚教授团队合作,发展了一种全分子多因素调控荧光团TICT的方法,并设计出具有宽动态响应范围和梯度敏感性的荧光传感器阵列,可应用......