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荧光光定量PCR结果的分析方法

荧光PCR的分析方法对荧光定量PCR结果的分析方法我们分为两种:绝对定量分析法和相对定量分析法。1、绝对定量分析方法,起始浓度的对数跟循环数的线性关系,标准曲线由已知拷贝数的标准品绘制,根据样品的Ct值,可求样品的模板量。(1)标准品的制备:1V的样品原液(i)+9V稀释缓冲液,得到ii;1V的ii +9V稀释缓冲液,得到iii;1V的iii + 9V稀释缓冲液,得到iv;1V的iv +9V稀释缓冲液,得到v。(2)拷贝数的计算:待测样本浓度(ng/ul)=OD260×40*稀释倍数样品分子量+碱基数×324待测样本拷贝数=待测样本浓度/样本分子量×6×1014从扩增数据得到循环数,通过标准曲线,我们可以求出样品的拷贝数。2.相对定量分析方法:其又可有双标准曲线法和双Ct法。所谓相对,就只是实验前后结果的对比,反映了反应前后的数据的差值。(1)双标准曲线法,分析简单,但是对于每一个基因,每一轮实验都需要做标准曲线,而且必须有特定......阅读全文

如何做好荧光定量PCR实验

荧光定量PCR实验指南一、基本步骤:1、目的基因(DNA和mRNA)的查找和比对;2、引物、探针的设计;3、引物探针的合成;4、反应体系的配制;5、反应条件的设定;6、反应体系和条件的优化;7、荧光曲线和数据分析;8、标准品的制备;二、技术关键:1、 目的基因(DNA和mRNA)的查找和比

结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用

【摘要】目的 建立结核分枝杆菌的荧光定量PCR检测方法,探讨荧光 PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法 根据结核分枝杆菌基因保守序列设计引物和探针,并构建标准品。对102例培养涂阳的结核痰液标本和45例非结核感染者的痰标本,应用荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌。 结果 荧

结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用

结核病是严重危及全球的公共卫生问题之一,自1985年以来结核病疫情在全球范围内急剧上升,据世界卫生组织报道,目前全球有近1/3的人感染了结核杆菌,即20亿人口感染了结核杆菌,其中活动性肺结核病人约2 000万,每年新增结核病人约800~1 000万,每年约有300万人死于结核病[1~3]。结核病已成

检测细胞凋亡的实验方法比较

◆ TUNEL 与 ELISA 检测凋亡的方法比较TUNEL法   细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3

BECIA2017新产品奖大盘点:赛默飞、安捷伦、岛津位居三甲

  分析测试百科网讯 2017年10月10日-13日,国内分析测试行业影响力最大的展会——BCEIA2017在北京国家会议中心开幕,展出当今国内外分析测试领域的前沿技术和先进仪器设备。本次展会上,组委会颁布了BCEIA 2017新产品奖,共计22家国产仪器厂商、74个产品。其中获奖最多的厂商是赛默飞

食品安全快速检测技术你知多少?

快速检测技术广泛用于食品安全快速检测,临床检验、检验检疫、毒品检验等公共领域。食品安全快速检测是指对食品利用便携式分析仪器及配套试剂快速得到检测结果的一种检测方式。    1、食品安全问题主要有害污染物    (1)农药,化肥:有机磷,有机氯,硝酸盐 

定 量 P C R

定量PCR 定义 以参照物为标准对PCR终产物进行分析或对PCR过程的进行监测,来评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR相对定量→绝对定量, 手工操作→自动化检测, 灵敏度与特异性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 特定的待扩增基因片段 起始含量越大,则指

实时定量PCR应用中的优化方案

 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具[1]。随着分子生物学技术研究的不断进展,定量PCR技术取得了突飞猛进的发展,不仅建立了一系

PPTD2018分论坛:体外诊断试剂研究和质量控制报告集锦

  分析测试百科网讯 2018年10月10日,“2018年蛋白和肽类药物及诊断试剂研发与质控国际研讨会(PPTD 2018)”在四川省成都市香格里拉大酒店召开(相关报道:PPTD 2018在蓉开幕 聚焦测量与标准、质量与安全)。在精彩的大会报告之后,会议还举办了体外诊断试剂研究和质量控制等分论坛,分

实时荧光定量PCR

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增。在扩增反应结束之后,我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析,也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析。无论定性还是定量分析,分析的都是PCR终产物。但是在许多

分子生物学常用实验技术(page 3)

分子杂交技术    互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DN

定 量 PCR 技 术 简 介

聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)是微量核酸扩增的有效工具,由于其灵敏、特异、快速等优点,在医学上已广泛应用与病毒、细菌病原体及遗传病、肿瘤的早期诊断。随着PCR技术的发展,特别是病毒或肿瘤的治疗监测、疾病的诊断、机体基因表达调控方面,不仅需要检测其存在是否

比较分子生理基因组学 —cDNA阵列的异种杂交实验

近几年来, DNA 微阵列已经被公认是分子生物学研究的一种标准方法。特别是在生物医学研究方面,常用物种的微阵列一面世就得到广泛应用。但是对于非模式生物来说 ,微阵列的应用尚未得到充分开展,而这些物种往往表现出一些很有趣的生理表型。对大多数比较生物学的研究者来说,制备一个新物种的 D N A 阵列或微

现代检测技术在食品安全检测中的应用

  摘要:指出了随着人们生活水平的提高,食品安全越来越受到大家的重视。论述了目前食品安全检测中常用的几种现代检测技术,主要有实时荧光定量PCR技术、核酸探针技术、酶联免疫吸附技术(ELISA)和高效液相色谱-质谱连用技术(HPLC-MS)和近红外光谱技术在食品安全检测的应用及研究进展。  

PCR技术应用十:HIV感染

  八十年代以来由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染而引起的艾滋病(AIDS)因其严重的危害性而受到人们高度重视,力争早期诊断和寻求有效治疗是防止其广泛传播的关键所在.聚合酶链反应(PCR)具有敏感、特异和快速的特点,是检测病毒、评价病情进展和探讨发病机理的有效工具.一、HIV的基因结构  HIV的基因

比较分子生理基因组学 —cDNA阵列的异种杂交实验

实验步骤 一、材料 这里用到的所有化学试剂都为分子生物学等级,或者用它们最高纯度的等效物。所有的塑料和玻璃制品,包括瓶子和移液器吸头都要高压灭菌,在核酸实验操作过程中必须始终戴手套。 cDNA A T L A S阵列从Clo

北京200余仪器和检测企业研发项目通过鉴定

   近日,北京市科委公布了《关于公示2015年度第一批北京市企业研发项目鉴定结果的通知》,本次鉴定结果通过了7000多个项目,其中涉及分析仪器、方法及耗材的研发项目有200多个。200多个项目共涉及40多家单位,其中莱伯泰科、东西分析、北京普析通用、中科科仪、华测检测、利德曼、滨松光子、

流式细胞技术基本原理应用和发展趋势

流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好的优点,是当代最先进的细胞定量分析技术之一。光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成

实质等同性(转录组学)实验

实验材料:小麦  试剂、试剂盒:β-巯基乙醇                                   &nb

全球学者献技 ICAS 2017 光谱分析分会场被拉曼“占领”

  分析测试百科网讯 2017年5月7日,由国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)和中国化学会(CCS)主办的2017 年国际分析科学大会(ICAS 2017)光谱分析分会场的报告继续进行。分析测试百科网注意到,本届光谱分析分会场的报告从数量上来说,主体为拉曼及相关技术。光谱分析分会场主持人,韩国汉

生物制剂中宿主残余DNA检测技术与标准的发展趋势

生物制品中残留DNA检测标准的变化2015年3月底,中国食品药品检定研究院网站的国家药品标准物质目录中新增加了一个编号为410001的产品:CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒(PCR-荧光探针法)。这个由中检院与中科院联合研发,由生物制药企业参与标定的试剂盒与现行美国药典(USP)建议的检测方法同步

关于食品中大肠杆菌检测方法的研究

  摘 要:随着人们生活水平的提高,食品安全问题受到越来越多的重视,在不断被报道的食品安全事故中,大肠杆菌是引起这些事件的主要的影响因素之一,是判断食品污染程度的一个重要参数,因此采用快速、可靠、简便的方法来准确检测食品中大肠杆菌数量是否超标是至关重要的。本文综述了大肠杆菌的传统检测方法以及最新的检

凝胶成像概述(一)

凝胶成像定义 凝胶成像即对dna/rna/蛋白质等凝胶电泳不同染色(如eb、考马氏亮蓝、银染、sybr green)及微孔板、平皿等非化学发光成像检测分析。凝胶成像系统可以应用于分子量计算,密度扫描,密度定量, PCR定量等生物工程常规研究。凝胶成像系统的原理样品在电泳凝胶或者其他载体上的

RT-PCR实验方法大全

RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求:1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不会出太大问题。 3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA存在,不是单

荧光定量PCR技术及其应用(二)

3 应用由于FQ-PCR具有高灵敏性,高特异性和高精确性的特点,目前,该项技术已被应用于病原体测定、肿瘤基因检测、免疫分析、基因表达、突变及其多态性的研究等多个领域。3.1 病原体测定由于PCR技术的问世,使得病原体检测能够快速而方便的进行。但由于其高灵敏性,实验操作很容易受到污染而出现假阳性。只要

赛默飞重推移动检测解决方案 定制化快速筛选

  2014年9月24日,赛默飞世尔科技亮相于上海新国际博览中心召开的2014慕尼黑上海分析生化展,隆重推出了赛默飞移动检测解决方案并召开新闻发布会,赛默飞中国

基因表达之RT-PCR之我见

在论坛上看到不停地有人在问RT-PCR的问题,实际上在以前的帖子中各位香主和eeflying(我为什么总是提他们?因为还是很佩服的哦,生怕自己说错了,被他们指出来哦)都谈到了很多,鄙人也充大头答了一些问题,但是还是有各种问题,由于的基因表达还有点实战经验(但也技止此而),所以想些点东西给大家参考,计

RT-PCR之我见

本文讨论的范围包括RNA酶保护分析,northernblot,原位杂交,半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不谈具体protocol,是因为各种书籍和kit说明书上都有,主要说一些原则,而且大部分是失败和成功的经验,还有小组讨论结果以及各种书里七零八落看的内容,希望对大家有用。 基因

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向

利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化             实验材料 T4 DNA 连接