荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

摘要： 维生素B2又名核黄素，在食品中以游离形式或磷酸酯等结合形式存在。膳食中的主要来源是各种动物性食品，其次是植物性食品的豆类和新鲜绿叶蔬菜。检测其含量也有着许多的方法，其中荧光分光光度法是对荧光物质进行定性和定量的有效方法，它是维生素B2含量测定的一个比较常用的方法。

本文以测定多维片中维生素B2（核黄素）元素含量为例，依据GB/T 5009.85-2003《食品中核黄素（维生素B2）的测定》，应用港东F-380型荧光分光光度计对多维片中维生素B2含量进行测定。结果证明此方法操作简便，线性良好是测定多维片中维生素B2含量的理想方法。

关键词：荧光分光光度法  维生素B2核黄素  多维片

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· 原理

核黄素在 440nm～500nm 波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与核黄素的浓度成正比。在波长 525nm 下测定其荧光强度。试液再加入低亚硫酸钠（Na 2 S 2 O 4 ），将核黄素还原为无荧光的物质，然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度，两者之差即为多维片中核黄素所产生的荧光强度。

· 实验条件

1、仪器及附件：

天津港东 F-380 型荧光分光光度计

荧光石英比色皿

2、分析条件： 

    激发波长：440nm

    发射波长：525nm

3、药品：

    硅镁吸附剂（60～100 目）、乙酸钠、木瓜蛋白酶、淀粉酶、盐酸、氢氧化钠、低亚

    硫酸钠（Na 2 S 2 O 4 ）、洗脱液（丙酮、冰乙酸、水）、高锰酸钾、过氧化氢、核黄素标准溶液（纯度 98%）等。

4、其他：

电热恒温培养箱、高压消毒锅、分析天平（0.0001g）、容量瓶、盐基交换柱、三角瓶、瓷坩埚、移液管、刻度试管、具塞比色管、试管架、擦镜纸、滴管、量筒、磁力搅拌器、pH 计等。

· 样品及标准样品处理

    特别注意：整个操作过程需避光进行

1、样品溶液的制备

（1）样品提取

    ① 水解

     ② 酶解

    ③ 过滤

（2）氧化去杂质

（3）核黄素的吸附和洗脱

2、标准溶液的制备

（1）核黄素标准储备液（25μg/mL）：

    将标准品核黄素粉状结晶置于真空干燥器或盛有硫酸的干燥器中。经过 24 小时后，

    准确称取精确称取 50mg，置于 2L 容量瓶中，加入 2.4mL 冰乙酸和 1.5L 水。将容量瓶置

    于温水中摇动，待其溶解，冷至室温，稀释至 2L，移至棕色瓶内，加少许甲苯盖于溶液表面，于冰箱中避光保存。

（2）核黄素标准使用液（1μg/mL）

吸取 2.00mL 核黄素标准储备液（25μg/mL），置于 50mL 棕色容量瓶中，用水稀释至

刻度。避光，贮存于 4℃冰箱，可保存一周。

3、空白溶液

待测试样及标准的荧光值测量后，在各管的剩余液（约 5～7mL）中加入 0.1mL20%的低亚硫酸钠溶液（Na 2 S 2 O 4 ），立即混匀，在 20s 内测出各管的荧光值，作为各自的空白值。

· 测定结果

应用港东 F-380 型荧光分光光度计的“波长扫描”模块，分别读取待测溶液荧光强度，根据计算公式得到样品维生素B 2 的含量。

· 测定结果

应用港东 F-380 型荧光分光光度计的“光度测定”模块，分别读取待测溶液的荧光强度，根据计算公式得到样品维生素B2的含量。

· 结论

采用荧光分光光度法测定多维片中维生素B2含量，操作简单，方法准确，是一种理想的方法。

由于维生素B2待测液遇光不稳定，因此实验对仪器的功能要求高。港东 F-380 型荧光分光光度计率先在硬件上采用了激发侧挡光快门的设置，从而避免了样品被强光的直接照射，使整个实验操作简便，结果重现性良好。