荧光分光光度法在黄曲霉毒素含量测定上的应用

摘要： 荧光分光光度法是对荧光物质进行定性和定量的有效方法。目前国家标准对于测定食品中黄曲霉毒素含量的方法以免疫亲和层析法为主，其中荧光分光光度法是一个比较常用的方法。

本文依据国家标准G B/T 18979-2003《食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》和G B 5413.37-2010《乳和乳制品中黄曲霉毒素M 1的测定》中的亲和免疫层析净化荧光光度法，应用港东F-380型荧光分光光度计对食品中黄曲霉毒素含量进行测定。结果证明此方法操作简便，线性良好是测定食品中黄曲霉毒素含量的理想方法。

关键词：  荧光分光光度法  黄曲霉毒素  免疫亲和层析  食品  乳品

· 原理

试样经过甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异的免疫亲和层析净化，此抗体对黄曲霉毒素B 1 、B 2 、G 1 、G 2 、M 1 具有专一性，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。用水将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱，加入溴溶液衍生，以提高测定灵敏度 。 洗脱液通过荧光光度计测定黄曲霉毒素（B1+B2 +G1 +G2）总量及黄曲霉毒素M1的量。

· 实验条件

仪器及附件：

天津港东 F-380 型荧光分光光度计

荧光石英比色皿

分析条件：

激发波长：360nm

发射波长：450nm

药品： 

样品前处理试剂：甲醇（色谱纯）、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钾；

样品衍生溶液：溴溶液储备液（0.01%）、溴溶液工作液（0.002%）；

标准校正溶液：二水硫酸奎宁、硫酸；

黄曲霉毒素标准品：B 1 、B 2 、G 1 、G 2 、M 1。

其它： 

分析天平（0.0001g）、三角瓶、容量瓶、高速均质器（18000r/min～22000r/min）、定量滤纸、移液管、玻璃注射器、黄曲霉毒素免疫亲和柱（B 1 、B 2 、G 1 、G 2 总量柱和M 1柱）、空气压力泵、离心机（转速≥7000转/分钟）、玻璃试管等。

· 样品及标准样品的制备

样品的提取：

（1）样品提取流程图

（2）样品提取流程图对应各实验环节加入溶液的量

免疫亲和层析净化：

（1）免疫亲和层析净化流程图

（2）免疫亲和层析净化流程图对应各实验环节加入溶液的量

标准样品待测液制备：

（1）国标方法

在激发波长360nm，发射波长450nm条件下，以0.05mol/L硫酸溶液为空白，调节荧光光度计的读数值为0.0μg/L；以荧光光度计溶液校准溶液（硫酸奎宁溶液）调节荧光光度计的读数值为20.0μg/L（乳和乳粉中读数值为2.0μg/L）。

（2）标准曲线法

用苯-乙腈（98+2）溶液配制黄曲霉毒素标准溶液0.100mg/mL（100μg/mL），分别准确吸取黄曲霉毒素标准溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL分别置于10mL容量瓶中，用苯-乙腈（98+2）定容,配制成浓度为5.0、10.0、15.0、20.0μg/mL的黄曲霉毒素标准曲线工作液。

· 测定结果

应用F-380型荧光分光光度计的“光度测定”模块建立黄曲霉毒素的标准工作曲线，并进行样品测定。

· 结论

采用荧光分光光度法测定食品中黄曲霉毒素含量，操作简单，方法准确，是一种理想的方法。

应用免疫亲和层析净化荧光分光光度法，建立黄曲霉毒素标准工作曲线所测试的数据比免疫亲和层析净化荧光光度法，硫酸及硫酸奎宁溶液校正黄曲霉毒素含量所得到的数据更加准确。