荧光定量PCR仪的选购

2003年非典型肺炎和2004年禽流感的爆发，使荧光定量PCR技术在临床检验中的应用前景大为提升。为了提升科研水平和检验水平，各单位争先恐后购人荧光定量PCR仪。如何选择更适合本单位实际情况的PCR仪，就摆在了许多科研人员的面前。针对上述疑问，结合各款PCR仪的特征，本人提出一些个人的看法。

1 PCR仪的分类及特性

1992年，日本人Higuchi首次发现实时荧光定量PCR技术。他在原有的普通PCR仪的基础上，加以改进，添加一个激发和检测装置，并通过在PCR反应液中添加染料溴化乙锭(EB)的方法，来实时监测整个PCR反应的全过程，这就是世界上第一台实时荧光PCR仪。

目前为止。商品化的PCR仪种类繁多。国外的品牌主要有ABI、Roche、MJ、Bio—Rad、Stratagene、Corbtt、Cepheid等，国内也有一些医疗公司在生产销售。

按照仪器的加热性能可以将它们划归为2类。

(1)一类是半导体(半导体+电热丝)加热。硅加热是使用最普遍的一种，导热好，易自动化，速度快，直接加热降温，效果好，但由于其使用的介质是金属，与反应管很难做到无缝接触。ABI、MJ、Bio—Rad等都属于这一种。 检验地带网

ABI(美国应用生物)公司主要销售Prism®7000、7300、7500、7900HT 4种实时荧光定量PCR仪。其中，Prism®7000为四色荧光，只能用于2种染料，TaqMan®和SYBR®Green I；Prisr® 7300为四色荧光，能够有效地分辨包括FAM "SYBR®Green I、VICnq/J0E 、TAMRA "和ROX"在内的多种荧光染料；Prism®7500为五色荧光。能够有效地分辨包括FAM SYBR®Green I、VIC ®/JOE、NED"/TAMRA" Cy3 ®、ROX"/TexasRed®和Cy5®在内的多种荧光染料。实时荧光定量PCR系统的全部96个样品孔采用同一卤钨灯作为光源，可发出全光谱的光源，易更换，但是寿命短。高效平台-7900HT系统是为支持高通量而构建的，光学系统经优化以适用于384~L板荧光信号的激活和实时检测。7300、7500、7900均可进行基因表达分析，病原体绝对定量分析，SNP基因型分析以及以阳性内对照为基础的阳性/阴性结果判定。但是所有定量实验都依赖于染料ROX，用于校正。 本文来自检验地带网

Bio—Rad(伯乐)公司的iCycler iQ实时定量PCR系统可4波长同时检测，定性和定量部分可独立工作，可完成梯度PCR，用于快速优化实验条件。第一个采用激发光与发射光双滤光片盘设置。结合荧光干扰校正技术。完全避免信号间的交叉干扰。独特的开放性加样误差校正技术，不依赖于ROX，避免人为加样误差，保证定量结果的准确性。5组滤光片位置使用户可以自由选择不同的检测波长。 检验地带网

MJ的Opticon、Opticon2和chromo4是采用LED光源PMT光电倍增管荧光检测器。96个单色LED光源对应96孔板，但是单色LED激发波长范围窄。Opticon是单道单个光电倍增管荧光检测器，升级的Opticon2是双通道~XPMT光电倍增管荧光检测器。chromo4~l0是四通道PCR系统。PMT灵敏度高但一次只能扫描一个样品，所I)~Opticon系列是逐孔扫描而非同时检测96个样品。梯度功能是它的主要优势之一。

Cepheid公司的Smart CycleflI．~0以其独特的功能，入选精彩生物通2004年度产品评选中年度科技进步产品前3名，是世界上唯一允许不同条件的PCR反应同时进行的定量PCR仪器。Smart CyclerII获得过1998年美国研发R&D100金奖， 机型小巧。有16个样品槽，它的独到之处在于这16个样品槽分别拥有独立的智能升降温模块，也就是说，这16个样品槽相当于16台独立的定量PCR仪，表明可以在同一定量PCR仪上分别进行不同条件的定量PCR反应，或者表明不同的实验人员可以在不同时间使用同一台仪器，节省时间。其允许不同条件PCR同时进行的独一无二的优点，是其它任何PCR仪都不具备的。升降温速度更快，高达10℃/s，整合有4通道光学检测系统，分别可以检测FAM/SYBR Green I、Tell Cy3、Texas Red和Cy5．可在同一样本中进行多靶点分析，同时检测4种荧光信号；可使用多种检测方法，包括Taqman探针、分子信标、荧光内插染料等。除了这些，美国Stratagene公司的Mx3000P定量PCR仪口碑也不错，4个检测通道，性能稳定。此外，国产的定量PCR仪种类也有很多，在此不再累述。