荧光显微镜技术简介

 荧光显微镜是荧光显微检测的专用工具，它是光学显微镜的—种。除了具有光学显微镜的基本结构和光学放大作用外，基于荧光的特性，还具备以下独特的功能：①提供足够能量的能激发出荧光的光源；②有着适应不同物质所博激发光涪的一组滤色片，从光源中选择合适的激发光谱，使析出的光谱与该物质的吸收光谱重合，以期望获得zui大的荧光；③还要建立一套截止滤色片，它使所需观察的荧光进入系统成像，而将其余的光波，包括发射光阻挡在外，用来提高图像的衬度；④放大的光学系统应适应荧光的特性，zui终获得既能观察又能摄影的高亮度、高分辨力的良好衬度的荧光图像；⑤仪器的安全性。应用汞灯要防止紫外线的泄漏和汞灯的爆炸，保证电器安全。

生物荧光显微镜基本形式有两种：透射式和落射式。透射型虽然在低倍时能获得良好的

高反差的成像，但与落射型相比荧光像较暗，故现在多使用落射型荧光显微镜。

     荧光吊微镜光源的选择取决于所需检测的荧光物质的吸收光谱，荧光色素的平均吸收波长峰值从紫外（340 nm）到黄绿光（595nm）。具有这些光谱的强光源有超高压汞灯、超高压佩灯和大功率的卤素灯。

     滤色片是荧光显微镜的关键部件，在荧光显微镜中按其功能可分为激发滤色片和截止滤色片两类。

    激发滤色片的功能是从光源中分析出所需的特定光谱，以激发标本产生荧光。激发滤色片一般按激发光谱分为：紫外区（uv）波段在340—380 ；紫蓝区（Y）波段在390—460nm；蓝光区（B）波段在460—500 nm”；绿光区（G）波段在500—570 nm，黄光K（Y）波段在570—595nm；

    截止滤色片的功能是仅把标本上发出的荧光透过成像，而将其他光阻挡不参与成像，一般激发滤包片安置在紧靠光源处，而截止滤色片在物镜与门镜之间。

免疫荧光小应用zui广的荧光色素是FIFC，它的吸收波段为450—540 nm，峰值在490nm，发射光波在500—550 nm，峰值在520 nm附近，呈黄绿色，峰值间隔30 nm：当选用短波通过十涉滤色片如KP90时．仅允许420—510 nm区域光透过，这种滤色片在透过区域内有极高的透射比（>80％）；在非透过区如>490 nm的长波透过率很低，因此能够亩效地消除长波方面的杂散激发光。