荧光显微镜滤色片的选用

荧光显微镜滤色片的选用

滤色片是荧光显微镜的关键部件, 在荧光显微镜中按其功能可分为激发滤色片和截止滤色片两类。激发滤色片的功能是从光源中分析出所需的特定光谱, 以激发标本产生荧光。截止滤色片的功能是仅把标本上发出的荧光透过成像, 而将其它光阻挡不参与成像, 一般激发滤色片安置在紧靠光源, 而截止滤色片在物镜与目镜之间。

按其透过光谱特性曲线可分为“短波通过”、“长波通过”和“波段通过”滤色片。波段通过滤色片按波带宽度又可分为“宽波带”和“窄波带”滤色片, 如果半宽带（即HW = 50% 的透射峰的主透射带的宽度之半）大于50nm , 视为“宽波带型”; 若小于20nm , 则可视为“窄波带型”。

    滤色片初期用贮放玻璃盒中的有色液体, 后改用带色胶质片, 由于易变色和使用不方便已被淘汰。现在经常使用的为色玻璃和干涉滤色片, 色玻璃大都属宽波带滤色片, 透过波段宽, 透过率随厚度而降低, 价格相对低廉。由于色玻璃与空气的界面上, 约有4% 光线被反射掉, 玻片愈多, 光能损失愈大, 限制了它的使用性能。干涉滤色片的出现, 可按需要制成能透过或截止一定波段的滤色片, 从而促使荧光显微术的进展, 现代技术上已能对某波段的透射率或反射率进行控制。

由此可见, 多数荧光色素和荧光发色团分子具有相当宽的吸收光波带和荧光波带, 峰值间隔又较大, 所以在需要得到强荧光时, 很少使用窄波带滤色片, 因为它致使相当大的光源能量损失了（没有利用） ,仅在光源的强发射谱线和激发时的吸收峰相重合时才使用。当使用宽波带滤色片时, 往往组织成分和光路中的自发荧光会被这类滤色片中的短波光激发出来, 加到荧光图象中而混扰。多数应用中, 激发滤色片的半宽约20nm 就能给出满意的结果。