荧光检测器的最大优点是有极高的灵敏度和良好的选择性,一般来说,它比紫外吸收检测器的灵敏度要高10~1000倍,可达μg/L级,而且它所需要的试样很少,因此在药物和生化分析中有着广泛的用途。
某些物质虽然本身不能产生荧光,但含有适当的功能团可与荧光试剂发生衍生反应,生成荧光衍生物,也可用荧光检测。衍生方法有两种,其一为柱前衍生,此法较简单,但定量重复性较差;其二为柱后衍生,此法重复性好,但会造成谱峰的扩展。在离子色谱中,可以采用柱后衍生的方式对氨基酸和肽进行分析。
早期的荧光检测器在离子色谱分析中的应用主要是采用离子色谱分离氨基酸,然后经柱后衍生,用荧光检测器检测。随着离子色谱技术的发展,目前离子色谱的氨基酸检测,已经可以采用通用的紫外检测器,或不经柱后衍生,直接利用脉冲安培检测,荧光检测器的离子色谱的应用也趋于减少。
随着离子色谱的广泛应用,特别是新的色谱柱发展,使离子色谱的应用范围从常规的阴离子发展到大量无机、有机可电解物质的测定,特别对环境中痕量的有机物的分析,采用紫外检测器往往难以达到较高灵敏度和较好检测限。为此,我们将离子色谱与荧光检测器联用,用于测定痕量的有机污染物,使灵敏度大大提高,检测限水平比紫外检测器降低2~3个数量级。一般强荧光物质往往具备如下特征:
(1)具有大的共轭π键结构。
(2)具有刚性的平面结构。
(3)具有最低的单线电子激发态。
(4)取代基团为给电子取代基。因此,荧光检测特别适用于含有-NH2,-NHR,-NR2,-OH,-OR,-CN基团,又含有多环芳烃的化合物,而这类化合物只要溶于水,均可以采用离子色谱分离。
例如采用阳离子交换分离,荧光检测器可以测定2-和4-氨基萘,采用荧光检a析方法。
pH值对可离子化的某些荧光化合物的影响很大。例如未解离的苯酚和苯胺分子会产生荧光,但其离子却不产生荧光。苯酚在pH=1的溶液中荧光最强,而pH=13的溶液中无荧光;苯胺在pH7~12的溶液中能产生荧光,而在pH<2和pH>13的溶液中都不产生荧光。
在紫外光照射下能产生荧光的化合物,绝大多数为环状化合物,但环状结构并不是产生荧光的必要条件。某些链状化合物如硬脂酸盐、棕榈盐也同样可产生荧光。
荧光检测器凡具有荧光的物质,在一定条件下,其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此,这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物的测定,其灵敏度很高(检测下限为10-12~10-14g/ml),痕量分析和......
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