蒽酮比色定糖法测定可溶性糖含量

实验目的

1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理
2.学习求标准曲线方程—最小二乘法
3. 掌握分光光度计的使用

实验原理

蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。上述特定的糖类物质，反应较稳定。
反应式：
该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。

实验步骤
1． 求标准曲线方程
取6只试管，按下表配制（移取）葡萄糖（G）标准溶液，沸腾7分钟取出，用自来水冷至室温，用721分光光度计比色，波长620nm，1＃管作为参比(保留)，求标准曲线方程。（G浓度为 200μg／mL，蒽酮试剂：2克蒽酮／每升85%H2SO4）

2. 样品含糖量的测定
（1）取菜叶（包菜和白菜两个样）准确称取1.00克剪碎研细后，放入大试管，加入25mL蒸馏水，煮沸10分钟，通过漏斗滤入250mL容量瓶中（可以抽滤），并用煮沸蒸馏水提取两次，滤液并入容量瓶中，滤纸上的残渣用水冲两次，冷却定容至刻度。
（2）吸取0.5mL 滤液于编号的三只试管中，以蒸馏水补足1.00mL；另吸取1.00mL滤液于另编号的三只试管中，加蒽酮试剂5.0mL（于冷水浴中操作），摇匀后于沸水浴中煮沸7分钟，取出冷却至室温，以求标准曲线的1＃管作为参比，用721分光光度计在620nm处测吸光度或透过率。
最小二乘法求标准曲线方程的公式：

X：G 的浓度（μg／mL）Y：吸光度A＝－㏒T
本实验要求相关系数r≥0.99