藻酸盐包裹小鼠肿瘤细胞实验

实验概要

本实验介绍了藻酸盐包裹小鼠肿瘤细胞实验操作流程。

主要试剂

藻酸钠，CaCl₂，FITC标记的葡聚糖(FITC-Dextran)

主要设备

移液器，磁力搅拌器，超净台，解剖台，注射器，荧光酶标仪，离心机

实验材料

小鼠肿瘤细胞，免疫小鼠

实验步骤

1. 将藻酸钠溶于无菌生理盐水，终浓度为 1.5%；

2. 收集培养的肿瘤细胞，用无血清的培养基洗涤1 次，将细胞沉淀重悬于1.5%藻酸钠溶液中；

3. 将上述肿瘤细胞悬浮液用 1 ml 加样枪缓慢滴入磁力搅拌的 250 mMCaCl₂溶液中，形成乳白色的藻酸盐小珠。继续静置于 250 mMCaCl₂ 中 30 min 即可使用。以上操作步骤均在无菌条件下进行；

4. 将第 4 次免疫后 7 天的小鼠用苯巴比妥钠 0.1ml( 按 100 mg/kg 计) 腹腔注射麻醉，小鼠麻醉后置于解剖台上，切开背部皮肤，皮下植入 4 粒藻酸盐包裹颗粒，缝合皮肤，外敷手术胶膜；5天以后，小鼠经尾静脉注入100 μl (按 100 mg/kg计) FITC标记的葡聚糖(FITC-Dextran)；

5. 20 min 后处死动物，取出藻酸盐颗粒，常温下加入1 ml 的生理盐水，剪碎研磨颗粒，再加入1ml的生理盐水，混匀标本，放置1 小时， 1500 rpm离心 5 min。取上清液用荧光酶标仪测定；

6. 用不同浓度的 FITC-Dextran 制备标准曲线。