发布时间:2020-06-15 11:12 原文链接: 蛋白质亲和纯化概述

蛋白质的分离纯化是研究蛋白质结构和功能的重要手段,也是制备工业用酶、抗体、疫苗、基因重组药物等的唯一途径。蛋白纯化的方法多种多样。常用的有以下几种方案:基于蛋白质的溶解度不同设计的盐析或等电点沉淀方法;基于蛋白质分子量差异的透析与超滤或凝胶过滤方法;基于蛋白质所带电荷不同设计的等电聚焦电泳或离子交换层析方法;以及利用特异性配体与目的蛋白结合的亲和层析法等等。相对核酸纯化而言,不同蛋白质的特性千差万别,摸索纯化条件往往是一项艰难而繁复的工作。

亲和层析是利用生物分子间的亲和吸附和解离而设计的层析方法,具有操作简单、条件温和、获得的蛋白纯度高等特点,特别适合于活性蛋白质的纯化,并且对表达量低的活性蛋白也具有良好的分离效果。常用的亲和层析基质包括:专门针对抗体的蛋白A或蛋白G亲和基质,针对生长因子和核酸结合蛋白的肝素型亲和基质,用于纯化含有标签的融合蛋白亲和基质,以及结合了特异性抗体的亲和基质等。随着基因重组表达技术的广泛应用,将目的蛋白与亲和纯化标签进行融合表达,再通过亲和层析法纯化出目的蛋白,已成为实验室最常用的一项技术。

GenStar公司提供两类琼脂糖亲和吸附基质,用于亲和层析柱的制备。一类为用于纯化带有His或GST标签的融合蛋白的金属镍基质或GSH基质;另一类为用于纯化多种来源的抗体以及免疫复合物的蛋白A和蛋白G交联琼脂糖亲和吸附基质。由于蛋白A和蛋白G对于不同种属或亚型的抗体吸附能力不同,请参照表6.1选用合适的纯化基质。当无法判别抗体来源或亚型时,可采用蛋白A/G双重交联基质,免去摸索纯化条件所浪费的时间和材料。

Protein AProtein G对各型抗体的相对结合力比较



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