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蛋白质的分离纯化是研究蛋白质结构和功能的重要手段，也是制备工业用酶、抗体、疫苗、基因重组药物等的唯一途径。蛋白纯化的方法多种多样。常用的有以下几种方案：基于蛋白质的溶解度不同设计的盐析或等电点沉淀方法；基于蛋白质分子量差异的透析与超滤或凝胶过滤方法；基于蛋白质所带电荷不同设计的等电聚焦电泳或离子交换层析方法；以及利用特异性配体与目的蛋白结合的亲和层析法等等。相对核酸纯化而言，不同蛋白质的特性千差万别，摸索纯化条件往往是一项艰难而繁复的工作。 亲和层析是利用生物分子间的亲和吸附和解离而设计的层析方法，具有操作简单、条件温和、获得的蛋白纯度高等特点，特别适合于活性蛋白质的纯化，并且对表达量低的活性蛋白也具有良好的分离效果。常用的亲和层析基质包括：专门针对抗体的蛋白A或蛋白G亲和基质，针对生长因子和核酸结合蛋白的肝素型亲和基质，用于纯化含有标签的融合蛋白亲和基质，以及结合了特异性抗体的亲和基质等。随着基因重组表达技术的广泛应用，将目的......阅读全文
实验步骤 一、设计具有标签的蛋白质时需要考虑的因素 亲和力和可溶性的选择 在大肠埃布氏菌中生产外源蛋白时面临两个挑战: 一? 是所用蛋白质表达系统的表达水平很低; 二是所表达的蛋白质被错误折叠进不溶性的聚集体—包涵体中。弱启
实验步骤一、设计具有标签的蛋白质时需要考虑的因素亲和力和可溶性的选择在大肠埃布氏菌中生产外源蛋白时面临两个挑战: 一? 是所用蛋白质表达系统的表达水平很低; 二是所表达的蛋白质被错误折叠进不溶性的聚集体—包涵体中。弱启动子、低转录起始或稀有密码子的存在引起的表达问题都可以通过在装配过表达质粒时将矫正
一、设计具有标签的蛋白质时需要考虑的因素亲和力和可溶性的选择在大肠埃布氏菌中生产外源蛋白时面临两个挑战: 一? 是所用蛋白质表达系统的表达水平很低; 二是所表达的蛋白质被错误折叠进不溶性的聚集体—包涵体中。弱启动子、低转录起始或稀有密码子的存在引起的表达问题都可以通过在装配过表达质粒时将矫正
实验步骤一、亲和介质的选择亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标，既保证较弱的非特异性吸附，又可以在整个过程中维持良好的流动特征。优选介质应具备便宜、易获取和使用简便的特点。
实验步骤 一、亲和介质的选择 亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标，既保证较弱的非特异性吸附，又可以在整个过
二、可溶性标签在重组蛋白表达中，特别是当在细菌中表达真核蛋白时，主要的瓶颈在于蛋白质的正确折叠与可溶性。一些可溶性蛋白已被作为标签用来改善目标蛋白质的折叠。这些标签应该与其他方法共同使用来促进蛋白质的折叠，如诱导后降低培养温度或者共表达伴侣蛋白（BaneyxandMujacic,2004;deMar
近年来中国生物工程杂志社(中国生物工程学会、中国生物技术发展中心、中国科学院文献情报中心主办)围绕蛋白质分离纯化与抗体制备、生物工程下游技术、蛋白组学技术与应用等主题多次成功举办了专题研讨班，受到了国内生物技术研发与产业界的普遍欢迎。应广大参会代表的要求，现定于2009年10月24~25日在北京
由中国生物工程杂志社（中国生物工程学会会刊）主办的第14期蛋白质分离纯化技术专题研讨班定于2012年8月11-12日在上海举行。本期研讨班课程综合了国内外最新的蛋白质分离纯化技术与方法，特别是广泛吸纳了历届参会代表的大量问题解答与反馈意见以及研发与产业中的实际应用需求，经权威专家的反复
近年来中国生物工程杂志社(中国生物工程学会、中国生物技术发展中心、中国科学院文献情报中心主办)围绕蛋白质分离纯化与抗体制备、生物工程下游技术、蛋白组学技术与应用等主题多次成功举办了专题研讨班，受到了国内生物技术研发与产业界的普遍欢迎。应广大参会代表的要求，现定于2009年10月24-25日在北京
二、配基的选择选择合适的配基，需要对配基和靶分子之间的天然相互作用有一定的认知及理解。靶分子与配基的相互作用必须是特异性结合，并且在不同的结合和洗脱条件下均应该稳定。此外，制订亲和纯化的方案时，需着重考虑能否购买到商品化配基，还是需要从头研制配基和介质。后者的成功在很大程度上取决于对蛋白质结构和相互
随着现代生物技术与生物产业的迅速发展，蛋白质分离纯化已成为现代生物工程的关键技术。应国内生物技术科研界与产业界的需求，中国生物工程杂志社(中国生物工程学会、中国生物技术发展中心、中国科学院文献情报中心主办)围绕蛋白质分离纯化与抗体制备、蛋白组学技术与应用举办了一系列的专题研讨班。本期研
浅述蛋白质分离纯化的新技术摘 要： 本文主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术，综和近年来国内外的一些研究结果，结合实际应用的例子，分析了各种分离纯化方法的优点，同时指出其不足之处。文章最后展望了蛋白质分离纯化技术的发展趋势。&nbs
当前，我国以疫苗和单抗药物为主要领域的生物制药研发已经初具规模，生物工程中下游的关键技术与配套基础正在加速建立与完善，国际生物产业的发展也将加快向中国转移。基因工程下游技术、蛋白质分离纯化技术等作为生物技术研究与产业化中的一线技术，在新产品开发、工艺流程优化、基因工程项目规划与实施等方面极为重要
实验步骤一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近，人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同
实验步骤 一、膜的制备 从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。 大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能
所有形式的亲和层析法都需要两个组分间形成特异性相互作用，通过这种作用可以纯化其中一种组分。免疫亲和层析即利用抗原和抗体的特异性相互作用，是遵循亲和层析原理的一个分类 [综述见 Subramanian(2002)]。事实上，免疫亲和层析是免疫沉淀程序规模放大的拓展应用，不同的部分在于, 层析后需要回收
凝集素是能可逆性结合碳水化合物的蛋白质。因为绝大多数凝集素至少每个分子有两个碳水化合物结合部位，所以它们可以沉淀糖蛋白和凝集细胞。凝集素也就可以用作糖蛋白的亲和配基，具有单糖的糖蛋白可用温和的蛋白质冼脱条件分离。虽然凝集素亲和层折没有很高的选择性，但是无疑它已成为蛋白质纯化的一种常用方法。它通常作为
实验步骤一、化学法和酶法细胞裂解微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况，而且应用这些机械的方法经常会遇到过度的产热和样品被氧化等问题。微量细胞裂解的简化方面的重大进
实验步骤 一、化学法和酶法细胞裂解 微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况，而且应用这些
实验步骤 一、多羟基反应单克隆抗体 我们最先使用了一类特殊的单克隆抗体, 并将其用于免疫亲和层析。这些抗体可以用于温和的免疫亲和层析, 因为洗脱条件只需要联合使用无离液盐和低分子质量的多羟基化合物 (多元醇），此条件下蛋白质呈非
细菌克隆的溶解实验可以用于：（1）从表达特定融合蛋白质的重组噬菌体构建噬菌体溶源菌；（2）从该溶源菌诱导合成并纯化出融合的目的蛋白质。实验方法原理具有原噬菌体的细菌称为溶原性细菌。噬菌体分为烈性噬菌体和溶原性噬菌体，在感染于寄主细菌细胞时，前者往往在菌体内增殖并将菌体裂解。实验材料大肠杆菌噬菌体试剂
蛋白质浓缩和溶质的去除实验 实验步骤 一、层
预计在新奇的一级分子和生物仿制药实体方面将会有突出的增长。一些进步的是改良的分析、开发和相互作用。现在已有许多用于去除關的方法，包括冻干、反向萃取、溶质析出，precipitation、透析(溶剂交换） 、超滤和层析技术。值得注意的是，在众多微和设备发展的支持下，小型化和高通量的蛋白质分析取得了极大
摘要：蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质，综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异，利用一种同时多种性质差异，在兼顾收率和纯度的情况下，选择蛋白质提纯的方法。关键词：蛋白质 分离纯化前言 蛋白
随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用，或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说，分子克隆
摘要：蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质，综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异，利用一种同时多种性质差异，在兼顾收率和纯度的情况下，选择蛋白质提纯的方法。关键词：蛋白质 分离纯化前言 蛋白
细菌克隆的溶解实验 实验方法原理 具有原噬菌体的细菌称为溶原性细菌。噬菌体分为烈性噬菌体和溶原性噬
随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用，或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说，分子克隆的下
BIORAD 采用 Profinity eXactTM融合标签表达系统纯化无标签的重组蛋白 亲和标签已成为后基因组学时代纯化重组蛋白常用手段。此方法无需了解蛋白质的生化特性或生理活性，就可通过带标签的重组融合蛋白选择性地与层析基质上的配体结合，从而得以纯化任何蛋白质。此方法与常规的层析方
BIORAD 采用 Profinity eXactTM融合标签表达系统纯化无标签的重组蛋白 亲和标签已成为后基因组学时代纯化重组蛋白常用手段。此方法无需了解蛋白质的生化特性或生理活性，就可通过带标签的重组融合蛋白选择性地与层析基质上的配体结合，从而得以纯化任何蛋白质。此方法与常规的层析方