方案1 用 FLAG抗原表位标记蛋白质进行蛋白质免疫共沉淀
方案2 细胞裂解液中相互作用蛋白的亲和纯化
方案3 多蛋白质复合体的非变性琼脂糖凝胶电泳实验
方案4 BN-PAGE 蛋白质分析法
方案5 采用交联法和质谱法对蛋白质复合体进行拓扑学分析实验
方案6 亚秒级光交联：用水溶性金属复合体监控蛋白质-蛋白质相互作用实验
方案7 位点特异性蛋白质-DNA 光交联法实验
方案8 用 FRET 法分析体内蛋白质的相互作用实验
方案9 用 GFP 嵌合体监控蛋白质-蛋白质相互作用实验
方案10 蛋白质阵列：显微镜玻片的制备
方案11 蛋白质阵列：标记蛋白并通过阵列检测来探究蛋白质-蛋白质相互作用
方案12 蛋白质阵列：标记复合体并通过阵列检测来研究蛋白质-小分子相互作用
方案13 蛋白质阵列：阵列的探针标记方法及激酶-底物相互作用的放射性印迹检测
方案14 蛋白质阵列：用“三明治法”研究复合体溶液
| 实验材料 | 抗 FLAGM2 单克隆抗体 293 T 细胞 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 抗 FLAGM2 琼脂糖亲和凝胶 甘氨酸 辣根过氧化物酶 IEF缓冲液 裂解缓冲液 NaCl 磷酸盐缓冲液 聚乙烯亚胺 RF10培养基 RPMI 1640 培养基 4 X SDS-PAGE 加样缓冲液 叠氮化钠 胰岛素 |
| 仪器、耗材 | 大型离心机 配有检测 GFP 滤片的荧光显微镜 培养箱 微型离心机 微量离心管 针头 多预装层析柱 摇床 SDS-PAGE 和 2D-IPG SDS-PAGE 仪器 超滤柱 |
| 实验步骤 |
一、用于小范围分析的代谢标记
二、细胞裂解
三、用于小范围分析的免疫共沉淀
四、用抗体层析柱大规模富集 FLAG 标记的蛋白质以及与它相互作用的蛋白质
五、用于纯化的蛋白质浓缩
六、纯化和鉴定相互作用蛋白
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