蛋白质、多肽液相色谱纯化方法介绍（三）

2、纯化前的准备工作

（1）样品稳定性试验

a、测定样品在pH2-9的稳定性；

b、测定样品在0-4mol/LNaCl及0-2mol/L硫酸铵中的稳定性；

c、测定样品在0-50%乙醇、甲醇中的稳定性；

d、测定样品在4-40℃的稳定性；

e、室温下静置过夜，测定对蛋白水解酶的稳定性。

（2）样品预处理

a、去除样品中颗粒物（0.45-0.22微米膜过滤或者10000g离心15分钟）

b、去除样品中脂类（10000g离心15分钟或有机溶剂抽提）

c、去除样品中核酸（加入核酸酶消化或者使核酸沉淀）

d、抑制样品中蛋白水解酶（加入蛋白酶抑制剂、低温下快速第一步分离或在蛋白酶缺陷宿主中表达重组蛋白）

（3）样品的保存条件：

短期储存（小于24小时）

a、避免接近或超过样品的稳定极限防止蛋白质变性或沉淀

b、在密闭容器中冰箱冷藏

较长期储存（数天）

a、b、同上

c、加入适当的抑菌剂

长期储存

a、同上

b、冰冻或者最好冻干（真空冷冻干燥）保存。