血栓与止血临床检验的影响因素

上海第二医科大学附属瑞金医院  王鸿利 王学锋    
上 海 血 液 学 研 究 所 

 在血栓与止血检验的全过程中，实验结果会受到诸多因素的影响。常见的有受检者状态、标本采集、抗凝剂与检测试剂盒、设备和仪器、实验方法、操作者技术以及血小板聚集等七个方面的因素。现分别简述如下。

一、受检者状态的影响
    受检者的状态， 如被测者生理变化、饮食改变、环境因素、服用药物等引起变化，在采集血标本时若未注意到这些因素也会对结果做出错误的判断。例如剧烈运动和月经期纤溶活性增高，高脂肪食物造成血脂升高可抑制纤溶活性，吸烟可使血小板聚集性增高，饮酒可抑制血小板聚集性。口服避孕药可增加凝血活性、降低纤溶活性，ticlopidine、阿司匹林等抑制血小板功能，肝素和口服抗凝剂等抑制凝血机制，尿激酶（UK）和葡激酶（SK）等可促进纤溶功能等。目前国内应用这些药物者较多，均应注意。

    在实验研究中应用动物血标本，除一般注意事项外，要明了种属差异，尤其在筛选药物和用动物模型进行药理学研究时更应特别注意。

二、标本采集的影响

    标本必须按照规定方法采集（详情参照NCCLS H2l-A2文件，1991），以保存凝血因子的全部特性，严格防止凝血因子和血小板被激活。

    （一）  采血方法  采血前首先要确认病人的身份，并在容器上注明病人的姓名、性别和病历号，然后再次确认，若可能的话，对于多次反复采血的病人最好在同一条件下采血，如病人处于静息状态的早晨或早餐前。

    对于大多数止凝血试验最好采用双筒注射器采血，但不能使用血气用注射器，因内含肝素会使凝血试验的结果延长。通常，第一管血液用于其他化学试验，第二管血液用于止凝血项目的检验。另外，止血带不应扎得太紧，最好不要超过5分钟，并应强调采血顺利，若采血速度缓慢或采血困难，会激活凝血机制，使凝血因子活性增高、血小板假性降低。为保证实验结果的准确性，最好采用硅化或塑料注射器，其容量误差要求小于10％。针头必须采用2l号以上（外径0.8mm以上），儿童可用23号。采完血后应拔掉针头，沿管壁将血液缓缓注入试管，要避免产生气泡，因为泡沫的产生可使纤维蛋白原、因子V和因子Ⅶ变性。然后迅速将血液和抗凝剂轻轻的颠倒混匀，避免用力振荡而破坏凝血蛋白。

    （二）  标本的贮存  血液要求采集于塑料或硅化试管中，并采用塑料移液管分离血浆。血浆最好贮存在塑料或硅化、带塞子的试管中，因为玻璃可以激活凝血过程，影响试验结果。未加塞子的试管放置室温会使血液中的CO2丢失，PH增高，使凝血酶原时间（PT）或活化部分凝血活酶时间（APTT）的结果延长。

    全血贮存在4~10℃不超过2小时，最好在1小时内分离血浆。富血小板血浆（PRP）要求在室温20~25℃下，以200~400g离心分离10分钟，我国采用800rpm，离心5分钟分离。在室温22~24℃下，富血小板血浆可存放3小时。大多数凝血试验采用乏血小板血浆，应以1000g以上离心20分钟，我国采用2000~2500rpm，离心30分钟分离，以去除全血中的血小板第3因子（PF3）、血小板第4因子（PF4）和某些凝血因子。乏血小板血浆在室温22~24℃下可存放2小时，不同存放温度和时间对凝血因子活性的检测会有不同程度的影响，尤其是对因子VIII、因子IX和因子XI活性会有较明显影响，结果见表l。总的看来，冷冻血浆中的凝血因子在越低温度下越稳定。

  全部试验不能在4小时内完成，应将血浆分装在小试管（0.5~1.0ml）中快速冷冻，贮存于-20℃或-70℃冰箱中。若不冷冻保存可使凝血因子活性异常，导致试验结果延长，而冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果会不准确。

    冷冻血浆融化时，不能在室温中让其自然融化，这样会使纤维蛋白原析出和凝血因子消耗。应将盛冷冻血浆的容器置37℃水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化。

    用于DNA分析标本，可以用枸橼酸钠或EDTA抗凝，采血量l0ml，离心后去除血浆，留取500ul血浆，然后取白细胞、血小板和红细胞层混合液500ul移至冷冻管中，-70℃或-80℃保存。