血清使用常见问题

血清使用常见问题

1、血清保存的最好方法？

建议血清最好保存在-15℃以下。若一次使用不完一瓶，建议无菌分装于适当的灭菌容器内冷冻备用。

2、如何解冻血清，才能保证其质量不会受损？

我们建议将血清从冷冻箱取出后，置于2℃～8℃冰箱中解冻，然后在室温下全融，解冻过程中必须规则地摇晃均匀。

3、为什么血清在解冻后会出现絮状沉淀？应该怎样处理？

血清中絮状沉淀产生的原因有很多，其中最普遍的还是由于血清中脂蛋白的变性所致，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解冻后，也会存在于血清中，这也是造成沉淀的主要原因，但这些絮状沉淀并不影响血清本身的质量。欲去除沉淀，可采取自然沉降法或者将血清分装于无菌离心管中，2000～3000rpm离心5min。一般不建议用过滤的方法去除絮状沉淀，因为沉淀会阻塞滤膜，造成过滤困难或无法过滤。

4、为什么要热灭活血清？有必要热灭活吗？

加热可以灭活血清中的补体系统，使补体去活化。通常未灭活的补体能够刺激平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺的释放、激活淋巴细胞和巨噬细胞，同时还能够参与溶解细胞的过程。

诸多研究表明大多数细胞的培养无须进行血清的热灭活；而在免疫学研究和ES细胞、昆虫细胞、平滑肌细胞的培养过程中，推荐使用热灭活血清。实验显示，经正确热灭活处理的血清，对细胞的生长只有微小的促进或完全没有促进作用，而通常因为高温处理影响了血清的质量，造成细胞生长速率降低。并且热处理过的血清，沉淀物明显增多，倒置显微镜下观察呈“小黑点”，往往会使研究者误以为是血清受到了污染，而把血清放于37℃中，沉淀物又会更增多，有会使研究者误认为是微生物的分裂增殖。因此我们建议若非必须，可以不进行热处理，既节省时间又确保质量。

5、如何避免沉淀物的产生？

我们建议您在血清使用的过程中，采用正确的解冻方法（冷冻→4℃→室温，参考Procell血清产品使用说明），若血清解冻时改变的温度太大（如冷冻→37℃）非常容易产生沉淀物。

温度过高、时间过久、摇晃不均匀等，都会造成沉淀增多，我们建议如非必要无须对血清进行灭活；若必须热灭活，应严格遵守56℃，30min的原则，并随时摇晃均匀。