西格列汀专利到期，仿制时需关注亚硝胺杂质NTTP

GLP-1类似药带火了2型糖尿病治疗药物。除了多肽类药物之外，小分子化药也是常用药物，其中DPP-4（二肽基肽酶-4）抑制剂是治疗2型糖尿病的药物之一。GLP-1是响应食物摄入来增强葡萄糖依赖的胰岛素分泌和抑制胰高血糖素。但GLP-1的葡萄糖调节作用是短暂的（半衰期约2分钟），因为天然的GLP-1可以被DPP-4快速降解。DPP-4抑制剂的作用增加了在体内的GLP-1的循环水平，并保留了GLP-1的降血糖作用，从而改善了血糖控制。

DPP-4抑制剂机理（图源：见图中所示）

默沙东研发的西格列汀（Sitagliptin）是第一个DPP-4抑制剂，可单独应用，或与其他口服降糖药组成复方药物治疗2型糖尿病。其优点是安全性好，低血糖及体重增加的不良反应发生率低。磷酸西格列汀片是进口产品独霸市场的典型代表，数据显示，其在2023年国内公立医院的销售额为26.56亿元，默沙东占据了99.65%的市场份额。

据了解，默沙东的磷酸西格列汀在国内的化合物专利CN1290848C已于2022年7月4日到期，但其晶型专利CN100430397C，即保护磷酸结晶单水合物的专利有效期至2024年6月18日。

经查询，国内已有30多家药企有西格列汀或其复方制剂的仿制药上市。但是，美国FDA在部分西格列汀制剂中发现亚硝胺杂质（Nitro-STG-19，即NTTP）超标^[1]，加强了对西格列汀的监管。

(图源：FDA官网，参考资料^[1])

NTTP的化学名为7-亚硝基-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪，属于NDSRI类亚硝胺杂质,源于西格列汀的部分结构。西格列汀和NTTP的结构如下图：

A：西格列汀，B：NTTP

岛津的应用工程师开发了一种基于三重四极杆型LC-MS/MS的NTTP检测方法，该方法同时测定西格列汀中多种常见亚硝胺杂质。

01 LC条件

仪器： Nexera XS LC-40

色谱柱：Shim-pack ScepterC18-120(150mmx3.0mmI.D.,1.9μm)

P/N:227-31013-04

柱温：45℃

流速：0.4mL/min

进样体积：10μL

流动相：

A相：0.1 %甲酸的水溶液

B相：0.1 %甲酸的甲醇溶液

梯度程序：

02 MS条件

仪器： LCMS-8060NX

离子源： APCI+

MRM参数：

NTTP和9种常见亚硝胺的MRM质量色谱图如下图所示，标品溶液浓度为1 ng/mL，相当于样品中NTTP含量为10 ppb（样品制备时，等效于100mg西格列汀API于1mL溶液）。

NTTP的终生暴露可接受限度为每天37纳克（即AI=37ng/day）^[2]，西格列汀的日服用剂量为100mg,则西格列汀中NTTP的限度为0.37ppm（370ppb）。

(图源：FDA官网，参考资料^[2])

本实验中，NTTP的定量下限为0.1 ng/mL，如下图所示，相当于样品中NTTP含量为1ppb，满足监管检验检测要求。

更多信息请参考岛津应用报告

Determination of Nitrosamine Impurities and NDSRI in Anti-diabetic Drugs on Shimadzu LCMS-8060NX

https://www.shimadzu.com/an/sites/shimadzu.com.an/files/pim/pim_document_file/applications/application_note/23956/an_04-ad-0301-en.pdf

参考资料

[1] FDA works to avoid shortage of sitagliptin following detection of nitrosamine impurity

https://www.fda.gov/drugs/drug-safety-and-availability/fda-works-avoid-shortage-sitagliptin-following-detection-nitrosamine-impurity

[2] CDER Nitrosamine Impurity Acceptable Intake Limits

https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/cder-nitrosamine-impurity-acceptable-intake-limits

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