质粒DNA提取实验

碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性，再将pH值调至中性使其复性，复性的为质粒DNA，而染色体DNA不会复性，缠结成网状物质，通过离心除去。

大肠杆菌                                                          

Tris-Hcl                                                                   EDTA                                                                  葡萄糖                                                                   NaOH                                                                  KAac                                                                  NaAc                                                                  异丙醇                                                                  溶菌酶                                                                  酚:氯仿                                                                  无水乙醇                                                                  LB培养基                                                          

超净工作台                                                                  培养箱                                                                  摇床                                                                  恒温水浴锅                                                                  台式离心机                                                                  取液器                                                                  低温冰箱                                                                  冷冻真空干燥机                                                                  电泳仪                                                                  水平电泳槽                                                                  紫外观测仪                                                          

1.  材料：大肠杆菌。

2.  仪器：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，台式离心机，取液器一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪。

3.  试剂：

（1）Solution I ：25 mM Tris-Hcl（pH7.4），10 mM EDTA（pH8.0），50 mM葡萄糖，高压灭菌，4℃保存。

（2）Solution II ：0.2 M NaOH， 1%SDS 现配现用。

（3）Solution III ：5 N KAc pH4.8，高压灭菌，4℃保存。

（4）3 M NaAc pH5.2，高压灭菌，4℃保存。

（5）异丙醇，溶菌酶（8 mg/ml），酚/氯仿，无水乙醇，70%乙醇，LB培养基，电泳试剂。

二、操作步骤

1.  细菌繁殖：LB培养基，2 ml/20 ml，37℃，200 rpm，摇一摇，过夜。

2.  离心10 min，5 000 rpm， 4℃；弃上淸液。

3.  沉淀（菌体细胞）预冷的TES缓冲液洗涤，离心10 min，5 000 rpm， 4℃，加入预冷的1 ml Solution I，冰浴10 min。

4.  重新悬浮，加入150 ul溶菌酶母液，室温放置5 min。

5.  加入1.2 ml Solution II， 冰浴5 min。

6.  加入0.9 ml预冷乙酸钾，混匀，离心10 min，12 000 rpm，4℃。

7.  加入1.5 ml异丙醇，-20℃冰箱内放置15 min。

8.  离心10 min，12 000 rpm，4℃。

9.  取沉淀，悬于400 ul TE缓冲液中。

10.  加入40 ul，3 M NaAc。

11.  酚/氯仿，抽提，乙醇沉淀。

12.  离心10 min，12 000 rpm，4℃。

13.  取沉淀，冷冻干燥，再悬浮于50 ul TE缓冲液中。

14.  电泳检测提取DNA的质量。