质粒dna的转化结果分析原理介绍

　　转化活性是检测质粒生物活性的重要指标，在基因克隆技术中，转化（transformation）是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA（包括人工染色体）导入细胞的过程， 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态，用于转化的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，以防止对导入的外源的切割，用 R -M -符号表示。 此外，为了便于检测，受体菌一般应具有可选择的标记（例如抗生素敏感性、颜色变化等）。 但质粒 DNA 能否进入受体细胞则取决于该细胞是否处于感受态（competence）。所谓感受态是指受体细胞处于容易吸收外源 DNA 的一种生理状态，可通过物理化学的方法诱导形成，也可自然形成（自然感受态）。 在基因工程技术中，通常是采用诱导的方法。 大肠杆菌是常用的受体菌，其感受态一般是通过用 CaCl2 在 0℃ 条件下处理细胞而形成，基本原理是： 细菌处于 0℃ 的 CaCl2 低渗溶液中，会膨胀成球形，细胞膜的通透性发生变化，转化混合物中的质粒 DNA 形成抗 DNase 的羟基一钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经 42 ℃ 短时间热激处理，促进细胞吸收 DNA 复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖，在选择培养基上便可获得所需的转化子。