质谱技术鉴定放射性同位素标记

为了更直观快速地锁定代谢产物，获取更多的代谢产物结构信息，人们引入了放射性同位素标记鉴定。该法是寻找、鉴定代谢产物非常直观有效的方法，适用于所有有机化合物的分析，其常用方法分为2类，一类是直接标记，另一类是间接标记。

放射性同位素直接标记是在进行代谢反应前对所研究化合物进行放射性同位素标记，药物经代谢反应后，直接得到含有放射性同位素标记的代谢产物。该方法能够非常直观地将代谢原型、代谢产物与复杂基质区分开来，快速而准确地找到代谢产物，同时根据放射性同位素的存在对代谢产物的结构鉴定具有一定的辅助作用。Jaganath等 在研究芦丁的肠道菌群代谢产物过程中，将14C标记的槲皮素与肠道菌群共孵，用HPLC-RC-MS2对其进行检测，发现黄酮醇迅速降解，根据其放射性元素，检测得到槲皮素的单氧化物、双氧化物及亚甲基醌中间体等代谢产物。放射性同位素标记法虽然准确、直观，但同位素标记位点直接影响代谢产物获取的全面性，且实验过程中需考虑放射性同位素本身的半衰期等性质特点，因此在放射性同位素的选择上需要根据放射性同位素本身的性质、实验条件与目的、实验人员的安全性等多方面进行考虑。在药物代谢研究中14C与3H是最常用的放射性同位素。4.2 间接标记法

常用的放射性同位素间接标记法有放射性同位素标记捕获剂法 、H/D交换法等。例如，Mezine等 将曲格列酮和冷冻人肝脏细胞一起共同孵育，同时加入同位素标记的谷胱甘肽与谷胱甘肽的混合物，应用LC-HRMS进行检测，可快速检测到单同位素标记的谷胱甘肽与活性代谢产物的结合物。

H/D交换法与LC-MS、GC、NMR等分析技术相结合，是近年发展起来用于化合物的结构鉴定的新方法，其利用氘原子容易与周围的氢原子发生交换的特点，实现对代谢产物的结构鉴定。Shah等 利用柱后注入D2O，比较进行H/D交换前后的质谱图谱，计算不稳定氢数目。使用柳氮磺胺吡啶对整个过程的各个参数进行优化，优化后的方法适用于各类化合物的分析，可在各类质谱设备上应用。同时成功应用于普伐他汀内酯和地氯雷他定的氮氧化物的分析和代谢产物的鉴定。相比用氘代试剂作为流动相的方法，该方法所消耗的氘代试剂量极少，且有望应用于仿制品的鉴别、质谱碎片离子分布、化学反应的中间过程分析等方面。