远离噪音点：westernblot封闭那些事

Western blot封闭步骤为什么重要？

样品从凝胶转印到膜上后，在抗体孵育之前都要进行封闭的步骤。 了解封闭的工作原理可提高western blot的质量，提高数据的特异性，灵敏度和信噪比。

蛋白封闭液是如何工作的？

通用的PVDF膜和NC膜具有很强的蛋白结合能力，如果跳过封闭步骤，一抗或二抗可能非特异性地与膜结合，导致高背景或“噪音点”的印迹（ 图1）。 封闭缓冲液覆盖或“封闭”这些非特异性蛋白结合位点，确保大部分一抗仅与靶蛋白结合（图2）

如果选择有效的封闭缓冲液，可以减少非特异性结合而不干扰抗体 - 抗原结合。

如何进行封闭液的选择？

选择正确的封闭缓冲液取决于几个因素，包括一抗的靶标和正在使用的检测系统。 一些最常用的封闭缓冲液含有蛋白质封闭试剂。 蛋白封闭试剂可以是蛋白质混合物，例如脱脂奶粉或血清，或单一蛋白质，例如BSA。 脱脂奶粉是一种流行的封闭试剂，因为价格低廉且易于找到。 然而，牛奶含有磷蛋白，可能干扰抗磷酸化蛋白抗体western blot检测。 牛奶还可以干扰基于生物素 - 链霉抗生物素蛋白的检测系统。 在这些情况下，含有BSA的封闭缓冲液可能是优选者。 或者，为了避免抗体和蛋白封闭试剂之间潜在的交叉反应，可以使用无蛋白封闭试剂如PVP-40。

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