Westernblot分析的自动化不再是梦想

　　Western blot是检测蛋白质的一项经典技术，几十年来一直受到人们的欢迎。不过，令人尴尬的是，这也是一个相当耗时并且难以重现的过程，有时带来惊喜，有时则是惊吓。

　　典型的Western blot流程大家都清楚，首先是蛋白电泳，分离后将蛋白质转移到膜上，然后进行一系列的处理，包括封闭、一抗孵育、洗涤、二抗孵育、洗涤，最后是显影。原理很简单，但过程不简单。

　　每个阶段都需要精心优化，即使实验条件最终确定，每一天的结果以及每个人的结果还是有差异。于是，研究人员开始投入自动化Western blot处理系统的怀抱，这不仅能带来一致的结果，还能节约宝贵的时间。

　　决定Western blot成功的关键因素是什么？许多研究人员都认为是一抗，其实不然，检测过程中的每个变量都有可能影响数据质量。据Precision Biosystems公司的CEO Russ Yukhananov介绍，洗涤步骤的重要性也不容小觑哦。这家公司推出了BlotCycler全自动蛋白质印迹杂交系统，可大大提高实验的重复性。之前，ProteinSimple也推出多款自动化系统（如：Wes，Peggy Sue，Simon等），以及单细胞Western平台—Milo。如今，研究人员有了越来越多的选择。

Precision Biosystems公司的BlotCycler全自动蛋白质印迹杂交系统

ProteinSimple的单细胞Western平台—Milo

　　一抗反复使用

　　Cytoskeleton的GOBlot™ Western Blot处理系统是在与数百名科学家沟通后开发的，带有四种最常用的Western blot程序。在加入封闭液和抗体溶液后，程序就可以运行。GOBlot的模块化特征允许多台仪器在不同时间运行，采用不同的程序和不同的抗体，所以相当灵活。

Cytoskeleton的GOBlot™ Western Blot处理系统

　　据Cytoskeleton的副总裁Ashley Davis介绍，GOBlot的一个主要优势是一抗（实验中最昂贵的试剂）可以回收利用。科学家曾经做过实验，将一抗回收后再重复使用三次，结果都很好，信号损失可忽略不计。

　　Prasanna Satpute-Krishnan是GOBlot™的忠实粉丝。“在实验室的启动阶段，实验室只有我一个，GOBlot对我帮助很大，”她说。“我只需要花10-15分钟的时间来计划我的Western blot，并加入封闭液、一抗和二抗，以及洗涤液，之后就可以不受干扰地做其他事情，让机器来完成Western blot。我最喜欢的功能是单独收集用过的一抗溶液，以便再次使用。总之，GOBlot不但节约了时间，也节省了经费。”

　　剑桥大学的研究助理Amy Emery在癌症研究中也定期开展Western blot，并且用的是定制合成的抗体。“尽管我明白，自动化处理设备可以节省时间，因为无需手动洗涤。不过我一直不敢用，因为在我的印象中，抗体会有明显的损失。一抗真的很贵，所以我不愿意接受不必要的浪费，但Western blot设备似乎有了很大的改进，既然能重用一抗，那么我愿意尝试一下，”她说。

　　诊断上的应用

　　自动化Western blot系统还可以提供诊断功能，比如Tecan的ProfiBlot™ 48。它每次运行可处理48个胶条样本，自动分配试剂并完成洗涤和孵育。它支持一系列的蛋白质印迹应用，如传染性疾病和自身免疫病的确认，以及过敏的筛查。这台仪器符合欧盟体外诊断指令98/79/EC，在封闭环境的一次性托盘上处理整个分析，以免人体暴露于传染性物质。

Tecan的ProfiBlot™ 48

　　Tecan的项目经理Gerald Habenbacher表示，他们已经与多家实验室合作，成功使用ProfiBlot™进行Western blot分析，并表示，这个系统的节省试剂功能可最大限度减少死体积，以便降低运行成本，同时，分配体积自动校准功能和预先设定的清洁方案使其操作起来更方便。

　　另一个大受欢迎的自动化系统是Bio-Rad的AutoBlot 3000。这台仪器能够在90秒内分配90个胶条，提供预先设定的实验方案，也接受用户自定义。Bio-Rad的产品经理Greg Stewart表示：“这个系统的灵活性极佳。它允许自由组合试剂体积、孵育时间、振摇速度和平台温度。AutoBlot 3000具有专门设计的托盘平台以及独特的吸液和分配系统，可以产生高度准确且重复的结果。”

Bio-Rad的AutoBlot 3000

　　尽管研究人员大多采用传统的手动方案来进行Western blot，但是自动化系统的优势越来越明显。你可以在运行Western blot的同时开展其他实验，大大节省时间，同时获得重现性高的结果。诊断领域的研究人员也可以更加放心，避免暴露于有害物质。

　　随着自动化的Western blot处理系统变得越来越先进，同时处理的印迹膜数量在不断增加，染色操作也有各种方案可供选择，可以满足各种各样的研究需求。当然，提高数据的质量和重现性，这更是它们的可贵之处。