迪马科技：奶粉中雌激素和孕激素的检测方法

　　 奶粉激素事件引起了社会各界的高度关注，迪马科技作为助您保障人类食品、环境、药品安全的实验合作伙伴，开发出下列分析方法，能够满足奶粉中雌二醇、雌三醇、炔雌醇、雌酮、己烯雌酚、己二烯雌酚、己烷雌酚等雌激素以及孕酮、乙酸甲地孕酮、乙酸氯地孕酮、甲基炔孕酮、甲羟孕酮等孕激素的检测。希望能对您的检测工作提供帮助。

　　1  反相SPE净化方法

　　1.1 提取

　　称取2.0 g奶粉(精确至0.01 g)，加入内标液(使用内标法时才需加入内标液)，加入16 ml 80%甲醇水溶液，振荡提取2 min或超声提取5 min。6000 rpm下离心5 min，取4 ml上清液，加入12 ml纯水，混匀得到样品稀释液，待净化。

　　1.2 SPE柱净化

　　ProElut PLS亲水亲脂平衡柱,150 mg/6 ml

　　活化、平衡：5 ml甲醇活化，5 ml水平衡；

　　上样：让样品稀释液通过PLS小柱，流出液弃去；

　　淋洗：5 ml 5%甲醇水溶液淋洗，淋洗液弃去；

　　洗脱：5 ml纯甲醇洗脱，收集洗脱液；

　　样品重组：40 ℃下将洗脱液氮气吹干，用1 ml 50%甲醇水溶液重新溶解残渣，微孔滤膜过滤后供仪器分析。

　　2  正相SPE净化方法

　　2.1 提取

　　称取2 g奶粉(精确至0.01 g)，加入内标液(使用内标法时才需加入内标液)，加入20 ml 80%甲醇水溶液，振荡提取2 min或超声提取5 min。6000 rpm下离心5 min，取10 ml上清液，与50 ml纯水混合得到样品稀释液，待净化。

　　2.2 SPE柱净化

　　ProElut CARB石墨化炭黑柱，500 mg/6 ml

　　ProElut NH2氨基柱，500 mg/6 ml

　　将样品稀释液通过经活化的ProElut CARB柱*，液体全部通过后将小柱抽干。然后将经活化的ProElut NH2柱*串接在ProElut CARB柱下方。10 ml二氯甲烷-甲醇溶液(7+3)洗脱并收集洗脱液，然后取下ProElut CARB柱，用2 ml二氯甲烷-甲醇溶液(7+3)洗脱ProElut NH2柱，合并洗脱液。然后氮气吹干洗脱液，再用1 ml 50%甲醇水溶液溶解残渣，微孔滤膜过滤后供仪器分析。

　　*ProElut CARB柱依次用6 ml二氯甲烷-甲醇溶液(7+3)、6 ml甲醇、6 ml水活化平衡；ProElut NH2柱活化平衡

　　3  仪器分析

　　3.1 雌激素分析条件

　　A HPLC条件：

　　色谱柱：Leapsil C18，100 x 2.1mm，2.7 μm

　　流动相：A，水；B，乙腈

　　梯度：略

　　流速：0.3 ml/min

　　柱温：40 ℃

　　进样体积：10 μl

　　B 质谱条件

　　电离源：ESI，负电离模式

　　电离源温度：100 ℃

　　毛细管电压：3 kV

　　脱溶剂气体温度：450 ℃

　　脱溶剂气体流量：0.2 l/min

　　3.2 孕激素分析条件

　　A HPLC条件

　　色谱柱：Leapsil C18，100 x 2.1mm，2.7 μm

　　流动相：A，0.1%甲酸水溶液；B，甲醇

　　梯度：略

　　流速：0.3 ml/min

　　柱温：40 ℃

　　进样体积：10 μl

　　B 质谱条件

　　电离源：ESI，正电离模式

　　毛细管电压：3.5 kV

　　电离源温度：100 ℃

　　脱溶剂气体温度：450 ℃

　　脱溶剂气体流量：0.2 l/min

　　关于迪马

　　迪马科技是一家致力于研发制造科学、高效的化学分析产品，提供完善服务和全面解决方案的知名色谱消耗品制造商，在色谱填料研发，色谱柱制造和相关分离产品等多个技术领域始终保持世界先进水平。核心技术产品包括：液相色谱柱、气相色谱柱、固相萃取柱、色谱溶剂和化学标准品。