通用型线粒体DNA损伤超长延展定量PCR扩增分析试剂盒

主要用途

   我公司通用型线粒体DNA损伤超长延展定量PCR扩增分析试剂是一种旨在运用rTth聚合酶XL进行超长延展PCR扩增，产生8.9kb线粒体DNA目标片段，根据产物量值的差异，来定量分析线粒体DNA损伤程度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于肿瘤、衰老、毒理作用、DNA修复等研究。产品即到即用，性能稳定，无核酶污染，操作便捷，敏感高效，重复性强。

注意事项

• 本产品为20次操作

• 操作时，须戴手套

• 建议使用带滤芯的枪头，避免污染

• 在－20℃冰箱里储存的产品避免反复冻融

• 建议样品为纯化的线粒体DNA

• 根据用户PCR仪的性能，决定是否加入矿物油（Mineral Oil）

• 本产品适合各种荧光定量PCR仪

• 建议整个操作在4℃下进行

• 配制完成后，即刻进行扩增反应，以确保反应物的活性

• PCR扩增反应的zui初3个循环为定量基线；3至15个循环的荧光信号的10倍值为荧光阈值；荧光信号达到阈值所需的循环数为Ct值（参考图像如下)

• Ct值作为端粒酶活性的计量单位

• 用户可以使用293细胞（10，100，和1000细胞数）作为阳性对照，以此建立标准曲线：横座标（X轴）为细胞量对数，纵座标（Y轴）为Ct值

• 建议选用正常淋巴细胞作为正常对照或校正对照，以此作为评价hTERT的参考指标；用户可以选用任何其它正常细胞或组织，例如肿瘤组织旁的正常组织等

• 建议选用hTERT阳性表达的MCF7细胞作为阳性对照，以此构建标准曲线：纵坐标（Y轴）为Ct值，横坐标（X轴）为已知细胞量对数值或拷贝数或RNA量等，其zui低有效用量作为样品检测量的标准

• 建议使用无模板作为阴性对照

• 内参液（Reagent E）为看家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase；GAPDH）作为比较分析时样品测试用量校正统一的参考标准

• Ct值可以作为hTERT表达的计量单位，也可以根据标准曲线转换为表达分子数进行计量