通道载玻片内细胞培养方法介绍

本应用简报说明了如何在细胞培养微通道内生长贴壁细胞。将描述细胞接种，培养基交换和光学性质。另外，显示了细胞培养通道和标准开放孔格式之间的主要差异。

为了显示细胞接种和μ-Slide处理，使用μ-Slide VI 0.4进行演示。像通常方法一样制备细胞悬液（例如3×105细胞/ ml）并将30μl加到通道中。将移液管尖端放在通道的入口上，并如图所示指向通道。快速分配并填充整个渠道。

细胞附着后，如上图所示，将60μl无细胞培养基填充到每个通道中。注意避免气泡。如果在细胞粘附后进行填充步骤，则不会将细胞冲洗出通道。如果您想在细胞接种后立即填充通道，请小心移液。
 

μ-Slide VI 0.4在显微镜观察时已充满细胞和培养基。

填充μ-Slide VI 0.4的Luer储液孔。
 
2.培养基交换
a.连续介质交换 - 推荐使用
对于连续介质更换，首先从储存器中移除旧介质。然后，将适量的新鲜培养基加入一个储液器中，同时从另一个储液孔中吸出。小心使用细胞培养移液器。我们建议体积至少是通道容积的3倍。重新填充储液器。
 
连续交换介质体积为3倍的介质。
 
b.完全的培养液交换 - 仅适用于昂贵的液体
 
如果仅仅更换通道内液体，请先清空通道。然后，将移液管尖端放在通道入口上，并小心地将液体从通道中吸出。使用细胞培养移液器彻底清除所有液体。为了重新填充通道，将通道容量的新鲜介质直接注入通道。避免产生气泡。重新填充两边的蓄液孔。
 
完全清空通道可能导致重新填充后形成气泡。
 
通道和储存孔液体完全替换。
 
 
3.通道载玻片与多孔载玻片
在下面部分，我们将μ-Slide VI 0.4（细胞培养通道）的特性与μ-Slide 8孔（开放格式）进行比较。

对于接种细胞，主要差异是结构内部液体的高度。两个系统的小区域部分如下所示。μ-Slide VI 0.4通道内部底部和顶部之间的距离为400μm。填充的μ-Slide 8孔载玻片没有顶部结构。在8孔载玻片里面，培养基约为0.3毫，通道载玻片比开放格式8孔载玻片薄7.5倍。
 
对于细胞接种，必须应用不同的细胞密度以在表面上获得相同量的细胞。在该示例中，目标是接种25个细胞/单位面积。由于μ-Slide 8孔内液体的高度是7.5倍，因此应用的细胞浓度必须低于相同的因子。
 
 
基于不同高度的液体内部μ-Slide VI 0.4和μ-Slide 8孔。在上面的例子中，相同的生长区域和细胞数量但不同的体积导致所需的细胞浓度不同。
 
 
为了获得相当程度的融合，我们建议使用3 ... 7 x 105细胞/ ml（μ-Slide VI 0.4）和4 ... 9 x 104细胞/ ml（μ-Slide 8孔）。这是两个几何形状之间相同的~7.5倍。细胞粘附后，每单位面积的细胞数相同。
 
由于不同的高度，不同的细胞浓度产生相同等级的细胞聚合。
 
4.通道μ-Slide的优点
与标准开孔格式相比，通道载玻片具有很强的优势。
 
a.相差显微成像效果更好
通道几何结构很方便使用相差显微镜，因为没有凹液面的影响，整个生长区域可以用相差技术观察。

与开放式多孔载玻片不同，通道载玻片不会干扰相差显微镜的光束路径，从而获得更好的相差效果。
 

开放式多孔培养板(图a,图b)：凹液面影响了了相差效果。只有中心部位能提供高质量的对比度。
 
通道式载玻片(图c,图d)：在通道几何结构中，光束路径始终对齐。整个视野都可以提供高质量的相差显微镜成像。
 
 
b.细胞分布均匀
 
在通道中，因为边缘效应小，贴壁细胞的同质性要好得多。
 
下面的显微图像，相差（a）和荧光（b）模式中显示了开放孔（1-3）中细胞分布的不均匀性和细胞培养通道（4-6）中的同质性。
 

1     开放式多孔载玻片，边缘位置成像
2     开放式多孔载玻片，随机位置成像
3   开放式多孔载玻片，中心部分
4     通道载玻片，边缘位置成像
5     通道载玻片，随机位置成像
6   通道载玻片，中心位置成像