重组人心肌肌钙蛋白I基因工程菌的构建

摘要:目的　构建稳定、高效表达重组人心肌肌钙蛋白I( cTn I)的基因工程菌株,为临床检测心肌损伤及预后提供诊断试剂材料,促进cTn I诊断标准化的研究。方法　采用RT -PCR方法从人心肌组织总RNA中克隆出全长的人cTn I基因,将其插入到pMD192T克隆载体中,经酶切和测序对目的基因分析,再插入到pET221a ( + )表达载体中,转化BL21 (DE3) ,对诱导表达的目的蛋白行SDS2PAGE和采用锐普心梗仪检测重组蛋白的抗原性并准确定量。连续传代试验验证基因工程菌稳定性。结果　克隆了全长的cTn I基因,目的蛋白表达量达菌体总蛋白的38% ,重组蛋白抗原性良好,基因工程菌具有较高的稳定性。结论 成功构建了稳定、高效表达重组人cTn I的基因工程菌。