骨骼细胞染色体制备方法

1. 在含有细胞培养基的细胞培养管中无菌添加骨髓样本1ml(参考细胞密度<1×106/ml)，盖紧培养瓶，充分混均；
2. 水平培养12, 24, 48h(37℃)；
3. 加入4-5滴秋水溶液，培养一定时间；
4. 离心3-4 min（2000 rpm）；
5. 去除上清液，保留0.5ml的细胞；
6. 重新充分混悬细胞1；
7. 加入5ml 低渗溶液(KCl 0.075M)，室温低渗5-7min；
8. 重复4、5、6操作，用Ibraimov’s溶液混悬细胞；
9. 加入5 ml 调整过的Ibraimov’s 溶液1 2 (92ml H2O+5ml 冰乙酸+3ml 甲醇)，混均，室温处理3-4 min；
10.重复4、5、6操作，用甲醇溶液混悬细胞1；
11.立即离心，重复4、5操作，用固定液混均细胞；
12.加入5 ml固定液1，重新混均3；
13.离心(1200 rpm) 5 min，去除全部上清液；
14.加入0.5ml新鲜配置的固定液混悬细胞3；
推荐：a. 滴片前将此样在室温下保持30min；
b. 使用新鲜配置的固定液；
15.滴片(干净的玻片)，在Maxchrome仪器中分散染色体4。
1 使用混旋器，保证悬浮细胞的一致性。
2 产生均匀的褐色和泡沫表明此步操作非常成功。
3 如果样品暂时不滴片，请在冰箱中保存。
4 推荐以下操作，以达到最佳的染色体分散质量：
a) 如果看到中期细胞没有染色体（“broken metaphases”），表明RH值过高；
b) 如果染色体没有完全分散，细胞质背景较重，表明RH值偏低。