骨髓细胞单细胞悬液的制备

骨髓液

肝素抗凝剂 PBS

1. 无菌抽取骨髓液 0.5 ml。

2. 将骨髓标本滴入含 1000 U/ml 肝素抗凝剂的 1 ml PBS 液中。

3. 再加入 PBS 液稀释至 10 mI。

4. 用吸管吸取 5 ml 稀释骨髓液徐徐加入盛有 4 ml 的人类淋巴细胞分离液液面之上。

5. 在以上条件下，骨髓有核细胞分层在 PBS 人类淋巴细胞分离液之间形成的界面上。

6. 吸取有核细胞层，加入到 10 ml PBS 液中，混匀。

7. 以 1000 r/min 离心 5 min，弃上清；收集骨髓细胞，加固定液或置低温冰箱备用。

1. 抽骨髓液时，先将注射器针头、针筒、针栓用肝素浸润，抽取时力量适中。

2. 在吸取淋巴细胞层时尽量少吸分离液，吸取量应掌握在 300 ul 左右，这样有利于洗去多余的分离液。

3. 溶红细胞的方法：以等量的蒸馏水加入到沉淀中，轻轻摇动片刻，见粉红色出现，立即加入大量生理盐水，混匀，离心，去除上清即可。