高地辛标记的DNA探针制备实验

DNA

dTTP dUTP EDTA SDS

水浴锅 培养箱

1.  建立一个标准100 μl 反应体系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP贮液，DNA酶Ⅰ酶量不变，15℃温育2 h。

2.  取小份在微型胶中进行电泳以检测探针大小。

3.  继续反应直到获得大小合适的DNA探针。

4.  加入2 μl 0.5mol/l EDTA和1 μl 10%SDS，68℃加热10 min 以终止反应。

5.  用G-50离心柱分离探针。

6.  用比色法或化学发光法测定地高辛标记的探针。

7.  用碱性磷酸酶偶联的抗地高辛抗体代替链亲和素-碱性磷酸酶交联物。

8.  利用地高辛标记的标唯DNA或是标好的地高辛探针作为对照检测地高辛掺入效率。