高效液相色谱柱后衍生法测定维生素B2

维生素B2又称核黄素，是维持机体正常结构与功能的必需营养物质，具有多种生理功能。维生素B2的缺乏可出现眼角炎、舌炎等一些症状，引起脂肪酸代谢障碍等。关于维生素B2的测定有很多方法，传统的有微生物法、荧光法，分光光度法，现代分析方法有电化学法、化学发光法、毛细管电泳法以及高效液相色谱法，其中高效液相色谱法因其前处理简单，样品用量少、分析速度快而逐渐成为维生素B2的常用检测方法。本文采用兰博液相色谱系统，建立了检测维生素B2的液相色谱方法，结果表明该方法简便、准确、结果令人满意。

1 测试条件

1.1 仪器

分析型高效液相色谱仪（HPLC），由AS1000自动进样器，Lablliance Series 高压泵、DAD检测器和Lablliance色谱工作站组成，配一支C18 Kromasil 色谱柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱温箱。

1.2试剂

维生素B2对照品（中国药品生物制品检定所），乙腈（色谱纯），水为屈臣氏蒸馏水，其他试剂为分析纯。

1.3对照品溶液配制

精密称取维生素B2对照品10 mg，置1000 mL容量瓶中，加入混合溶液（冰醋酸0.5 mL与4%氢氧化钠溶液3 mL，加水至100）适量，振摇使溶解，用上述混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得浓度为10 ug/mL维生素B2溶液，作为对照品溶液，备用。

1.4色谱条件：

色谱柱：Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；

流动相：乙腈-0.008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰乙酸（12:87:0.25:0.75）；

柱温：室温；

流速：1.0 mL/min；

检测波长：267 nm；

进样量：20 uL。

2测试结果：

2.1 紫外检测波长的选择

在200～450 nm对维生素B2对照品溶液进行波长扫描，结果表明，在267、375、444 nm处有zui大吸收，zui后选择在267 nm处对维生素B2进行测定。标准品的高效液相色谱图如图1所示。

图1 维生素B2对照品溶液的高效液相色谱图

2.2线性关系、方法检出限考察

以对照品溶液，分别进样5、10、20、30、40 uL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，线性回归方程为： Y = 21.7962 X + 39532，r = 0.9997。表明维生素B2进样量在0.05～0.40 ug浓度范围内线性关系良好。

2.3 精密度实验

对维生素B2对照品溶液连续测定6次，以保留时间和峰面积的RSD考察仪器的精密度，褪黑素的保留时间和峰面积的RSD分别为0.48%和 1.32%。

3结论

本文采用高效液相色谱对维生素B2进行测定，结果显示本方法方便、准确、精密度高，重现性好，可以满足日常分析需要。