高效液相色谱法中硅胶键合柱的清洁和再生

　　再生被污染 HPLC 柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，利用简单的步骤来除去这些污染物往往能恢复其色谱行为。有时候，经过多次操作以后的色谱柱用 90～100％的溶剂 B（双溶剂反相系统中较强的溶剂）冲洗 20 个体积可以清除污染物。

        例如，柱子中残留的脂质就能用非水溶剂如甲醇、乙晴、四氢 呋喃。

　　如果你使用的是缓冲液系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度有机溶剂可能会使 HPLC 流动体系中的缓冲液沉淀，这样会导致更大的问题如柱头 堵塞、管道堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。应该先用无缓冲流动相（即把缓冲液换成水）。冲洗 5～10 个体积以后才更换强溶剂。

　　有时候，强溶剂也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。那么更强的溶剂或者是一系列溶剂就有必要用来清洗柱子了，如果污染物是非生物物质，使用者可以跳过一个或多个另外的有机溶剂去除污染物。溶剂与溶剂之间的组合有很多。到柱子厂家的网页上能找到推荐的溶剂系统。

　　一般来说，所有的清洗方法都有类似的形式。所用的溶剂都是随溶剂强度增加，经常最后一个溶剂是非常疏水的（如醋酸乙酯甚至是烃），可以用来溶解非极性物质 如脂质和油类。我们必须保证一系列溶剂中每个溶剂都能与下一个溶剂互混。

　　清洗过程要结束时，必须借助一个中等强度能互混的溶剂而回到原始溶剂系统。例如， 异丙醇是一个非常好的作为中间步骤的溶剂，因为它能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度非常大，必须确保较低的流速以免使泵压过高。

　　当然，如果使用紫外检测器的话，避免溶剂在紫外区域有吸收，要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。

　　对于典型的硅胶键合柱来说如果没有缓冲溶液的话推荐使用以下溶剂系列：

　　100％甲醇

　　100％乙晴

　　75％乙晴－25％异丙醇

　　100％异丙醇

　　100％二氯甲烷

　　100％正己烷

　　用二氯甲烷或正己烷以后，由于溶剂相容性柱子必须用异丙醇冲洗后才能用原来的水相溶剂。每种溶剂至少冲洗 10 个柱体积。如 250mm×4.6mmHPLC 分析柱，分析者可以用 1～2ml/min 的流速来冲洗，要回复原来的溶剂体系，不需要每一步都冲洗，可以跳过中间步骤。中间步骤推荐使用异丙醇，然后用没 有缓冲的流动相，最后回复起始流动相配置。四氢呋喃是另外一种比较受欢迎的去除污染的溶剂。如果使用者怀疑柱子被严重污染，可以二甲基亚砜（ DMSO）或 者二甲基甲酰铵和水按 50： 50 的比例混合用低于 0.5ml/min 的流速流过色谱柱。成功再生反相柱子是一个非常耗时间的过程，溶剂冲洗可以利用梯度系统过夜操作。