高架十字迷宫和强迫游泳实验相关慢性刺激对链脲佐菌..

高架十字迷宫和强迫游泳实验相关-慢性刺激对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠的影响

慢性刺激对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠的影响

〔摘 要〕 目的 观察慢性刺激（ＣＭＳ）对大鼠糖尿病（ ＤＭ）发病及进程的影响及其在 ＤＭ 发生、发展中的作用。 方法 应用链脲佐菌素（ ＳＴＺ）加高脂高糖饮食诱导 ＤＭ 大鼠的过程中，增加 ＣＭＳ 因素，观察 ＣＭＳ 对大鼠生化指标和行为学的影响。 结果 与正常组相比，ＤＭ 组和 ＤＭ＋ ＣＭＳ 组大鼠血糖及血清胰岛素水平均升高（P＜ ０. ０５） ，出现了明显的胰岛素抵抗现象；与正常组大鼠相比，ＣＭＳ 组、ＤＭ 组及 ＤＭ＋ ＣＭＳ 组大鼠的上窜时间均缩短，不动时间延长（均 P＜ ０. ０５） ；ＤＭ＋ ＣＭＳ 组大鼠进入开放臂的次数和停留时间亦明显缩短（P＜ ０. ０５） ；与正常组相比，各实验组大鼠血清皮质醇水平均明显升高（P＜ ０. ０５） 。 结论 慢性刺激本身并不能直接诱发 ＤＭ，但它的存在可加重大鼠的胰岛素抵抗，促进 ＤＭ 的发生和发展。
〔关键词〕 慢性刺激；糖尿病；强迫游泳实验；高架十字迷宫

大量资料显示，慢性刺激（ＣＭＳ）对人类的健康具有非常重要的影响，尤其是对糖尿病（ＤＭ）病人影响更大，但 ＣＭＳ 对ＤＭ 的发生、发展会造成什么样的结果还不十分清楚。 本实验在应用链脲佐菌素（ ＳＴＺ）诱导 ＤＭ 的基础上增加了 ＣＭＳ 的因素，观察了 ＣＭＳ 因素对大鼠血糖、抑郁和焦虑行为、血清皮质醇及胰岛素水平的影响，从而确定 ＣＭＳ 对大鼠 ＤＭ 发生、发展的影响。

1 材料与方法

1. 1 动物分组与模型制备 将 ４８ 只清洁级 Ｗｉｓｔａｒ 雄性大鼠随机分成四组，正常组：１２ 只，不做任何处理；ＤＭ 模型组（ＤＭ组）：１２ 只，腹腔注射 ＳＴＺ（２５ ｍｇ ／ ｋｇ 溶于 ０. １ ｍｏｌ ／ Ｌ 柠檬酸缓冲液，ｐＨ＝ ４. ４５），同时给予高脂高糖饮食，以空腹血糖值高于１３. ６ ｍｍｏｌ ／ Ｌ 者为 ＤＭ 造模成功；ＣＭＳ 组：１２ 只，给予电击足底３０ ｍｉｎ，４５℃热刺激 ５ ｍｉｎ，黑白颠倒 ２４ ｈ、禁食 ４０ ｈ、禁水 ２４ ｈ、４℃冰水游泳 ５ ｍｉｎ、夹尾 １ ｍｉｎ、无刺激 ２４ ｈ，２８ ｄ 为 １ 个循环，每天采取一种刺激，同种刺激不连续出现；ＤＭ＋ ＣＭＳ 组：１２ 只，在腹腔注射 ＳＴＺ＋ 高脂高糖饮食的基础上增加 ＣＭＳ因素。 ＤＭ组死亡 ４ 只，ＤＭ＋ ＣＭＳ 组死亡 ２ 只。

1. 2 标本采集及指标检测

1. 2. 1 强迫游泳（由上海欣软信息科技有限公司提供）行为学测定 ＣＭＳ 前后对大鼠进行行为绝望探究试验，记录 ５ ｍｉｎ 内大鼠上窜和不动时间，观察大鼠 ＣＭＳ前后产生抑郁的行为学变化，实验方法详见参考文献。

1. 2. 2 高架十字迷宫（由上海欣软信息科技有限公司提供）行为学测定 记录 ５ｍｉｎ 内 ＣＭＳ 前后大鼠十字迷宫的行为学指标：①进入开放臂次数（ＯＥ）：进入到任一开放臂的次数，以大鼠 ４ 个爪子均进入到臂内为准，中途一个爪子从该臂中完全退出则为该次进行活动完成；②进入开放臂时间（ＯＴ）；③进入封闭臂次数（ＣＥ）：进入任一封闭臂的次数，以大鼠 ４ 个爪子均进入到臂内为准。 ＯＥ％ ＝ＯＥ ／ （ＯＥ＋ＣＥ）× １００％；ＯＴ％＝ ＯＴ／ ３００ ｓ× １００％。

1. 2. 3 血糖测定 实验结束后对大鼠禁食 １２ ｈ，且乙醚麻醉后内眦静脉取血应用电化学方法检测血糖水平。

1. 2. 4 血清胰岛素及皮质醇水平测定 实验结束后禁食１２ ｈ，乙醚麻醉后内眦静脉取血，分离血清，应用放射免疫分析法测定血清胰岛素和皮质醇水平。 胰岛素抵抗指数（ＨＯＭＡ）＝空腹胰岛素× 空腹血糖／ ２２. ５。

1. 3 药物及试剂 ＳＴＺ：美国 Ｓｉｇｍａ 公司。 胰岛素试剂盒：北京北方生物技术研究所。 皮质醇试剂盒：北京北方生物技术研究所。

1. 4 统计学处理 采用 ＳＰＳＳ２１. ０ 软件进行单因素方差分析、ＬＳＤ 检验和 t 检验。

3 讨 论

ＣＭＳ 通过对动物长时间、无规律的刺激，导致动物心理状态改变，抵抗外界刺激的敏感性下降，机体自身调节能力降低，神经- 内分泌系统功能紊乱，出现情绪和行为障碍，从而可导致抑郁症等多种疾病的发生。 ＤＭ 作为一种慢性疾病，近年来发病率呈现逐年增加的趋势，成为当今社会威胁人们健康的一个主要因素。 随着人们生活节奏的加快，在日常生活中各种 ＣＭＳ因素也逐渐增多。

本实验结果说明 ＭＣＳ 对动物的心理改变并不足以诱发ＤＭ 的发生，但当 ＣＭＳ 与其他因素合并作用于机体时就会大大地促进 ＤＭ 的发生、发展。 这可能是由于 ＣＭＳ 本身对机体造成心理紊乱状态和行为上的改变，导致机体内分泌功能失调，出现激素水平上的变化，这些变化又进一步加重糖代谢紊乱的发生，从而加速了 ＤＭ 的发生和发展。 此结果与国外实验室的研究结果一致。

强迫游泳是评价大鼠抑郁行为的一个公认指标，我们发现 ＤＭ 大鼠在未受到 ＣＭＳ 的情况下也均表现出了不同程度的抑郁，ＣＭＳ 则又加重了这种抑郁状态。 ＣＭＳ 和 ＤＭ 本身虽然可导致大鼠出现轻微的焦虑状态，但实验前后并无显著性差异，而 ＣＭＳ 合并 ＤＭ 却可导致大鼠出现明显的焦虑行为。 此结果进一步证明了 ＣＭＳ 可加重 ＤＭ 的发展进程。 ＣＭＳ 以一种心理应激形式作用于 ＤＭ 大鼠，使大鼠机体内糖代谢紊乱，糖耐量降低，胰岛素水平增加，使得胰岛素抵抗显著增加，从而导致血糖升高，加重 ＤＭ 的进程。海马是应激损伤的敏感区，也是 ＨＰＡ 轴应激反应的高级调节中枢，ＣＭＳ 作为一种应激源，能够使机体产生负性心理和行为状态的改变，从而造成海马结构和功能损伤，而海马的损伤又使得 ＨＰＡ 轴对多种应激源的敏感性增强，最终导致皮质醇的分泌升高，而这一分泌升高又会促进糖异生，增加胰岛素抵抗，促进ＤＭ 的发生、发展。 本研究中结果显示，ＤＭ 和ＣＭＳ 都可引起皮质醇的升高，这可能是 ＣＭＳ 加速 ＤＭ 发生、发展的一个主要因素。

综上所述，ＣＭＳ 本身并不是诱发 ＤＭ 的原因，但 ＣＭＳ 可加速和加重 ＤＭ 的发生和发展。 这为临床 ＤＭ 病人的护理提供了一个可靠的理论依据，应尽量减少对 ＤＭ 病人心理和环境的刺激，这样有利于减少并发症和病情的控制。