鼻咽癌人源抗独特型基因工程抗体的原核表达及鉴定

摘要: 目的构建鼻咽癌人源抗独特型单链抗体原核表达载体, 对其产物做初步鉴定, 为鼻咽癌疫苗制备奠定基础。方法采用分子克隆技术, PCR 扩增G22ScFv 基因, 并将其克隆到原核表达载体pET25b(+)上, 将重组子转化大肠杆菌BL21 (DE3), 经IPTG 诱导表达后, 表达的蛋白经His- tag 纯化试剂盒纯化后复性。SDS- PAGE 及Western blot 分析融合蛋白。结果构建的原核表达载体pET25b(+)- G22 经测序检测, 序列正确。在大肠杆菌中G22ScFv 以包涵体形式获高效表达, SDS- PAGE 及Western blot 鉴定表达的目的蛋白Mr为25 kD, 同时证实载体构建及表达均正确。目的蛋白经试剂盒纯化后电泳分析纯度达95%以上。结论利用基因重组技术, 在原核细胞中表达出重组G22ScFv 并得到纯化, 为研究鼻咽癌疫苗打下了基础。