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实时荧光定量PCR（RealTimePCR）实验流程

一、RNA的提取(详见RNA提取及反转录) 不同组织样本的RNA提取适用不同的提取方法，因为Real-TimePCR对RNA样品的质量要求较高，所以，正式实验前要选择一款适合自己样品的提取方法，在实验过程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。 在总rna的提取过程中，注意避免mRNA的断裂；取2ug进行RNA的甲醛变性胶电泳检测，如果存在DNA污染时，要用DNaseI进行消化(因为在处理过程中RNA极易降解，建议体系中加入适量RNA酶抑制剂)。 二、DNAseI消化样品RNA中的DNA 用DNaseI消化DNA 组份加量 模板(RNA)10ug RNaseInhibitor4ul DNaseIbuffer10ul DNaseI10ul DEPC处理H2O至100ul 混匀，37℃90min 三、RNA琼脂糖凝胶电泳 1.1%的琼脂糖凝胶电泳凝......阅读全文