2010北京色谱年会成功召开

发布时间：2010-12-12 18:47 原文链接： 2010北京色谱年会成功召开

　　2010年12月10日，北京理化分析测试技术学会色谱学会举办的“2010北京色谱年会”在北京京东宾馆隆重召开。来自科研院所、质检机构、仪器厂商等二百余位色谱界专家学者、实验室人员、技术工程师等参加了本次年会，共同探讨了色谱技术的最新成果、发展趋势及其在健康、环境等领域的应用，进一步促进了北京地区色谱技术的应用与交流。

2010北京色谱年会会场

　　本届色谱年会由中国色谱学会常务副理事长武杰先生主持，北京色谱学会理事长刘国诠研究员致开幕词，中国分析测试协会汪正范研究员主持大会报告。中国科学院大连化学物理研究所张玉奎院士在百忙中出席年会，并向参会者报告了国内色谱技术的最新进展。

中国色谱学会常务副理事长武杰先生中国分析测试协会汪正范研究员

　　刘国诠理事长首先感谢中科院张玉奎院士、国家疾控中心吴永明研究员、色谱界各位同仁和朋友们以及赞助厂商对北京色谱年会的热情支持，欢迎大家的到来。

北京色谱学会理事长刘国诠研究员

　　一年多来，北京色谱界非常活跃，这得益于北京社会、经济和科技的长足发展，从而促进了色谱和相关领域的深入民心。在这样的大背景下，色谱界专家学者辛勤努力，使色谱技术和应用得到了蓬勃发展。所以，今天我们汇聚一堂，共同探讨色谱的发展，相信大家一定会受益匪浅。另外，我们高兴地看到，参会的既有我们的老朋友，也有年轻的学者和科普工作者，他们代表着北京色谱的未来。北京色谱学会是一个互动交流的群众性社会团体，按照自己的章程，换届选举正在紧锣密鼓地进行，相信在新一届理事会的带领下，北京色谱学会将迎来生龙活虎的新景象。大会的成功召开，离不开大家的积极参与和厂商的鼎力赞助，希望大家携手把北京色谱的事情做好，祝会议圆满成功。

蛋白质组分离鉴定方法进展

　　中国科学院大连化学物理研究所张玉奎院士作了题为《蛋白质组分离鉴定方法进展》的报告，主要介绍了蛋白质组分离鉴定和定量的新技术、新方法。

中国科学院大连化学物理研究所张玉奎院士

　　2010年9月在悉尼的蛋白质组组织年会上，正式宣布启动人类蛋白质组计划。该项计划包括基因中心策略(人类染色体蛋白质组计划)、疾病中心策略(人类重大疾病蛋白质组计划)和蛋白质中心策略(人类/器官/体液蛋白组计划)三个部分。蛋白质组学发展至今，在约20344个蛋白质组成的人类蛋白质库中，已经发现了约7000个强证据、约5000个弱证据，还有8000多个没有证据需要新的技术，而这些很多是低丰度(低拷贝)的蛋白，今后5～10年的挑战将是从高拷贝到低拷贝数、从定性到定量分析。

　　蛋白质组分离鉴定新技术新方法

　　首先，张院士回顾了近年来，国内科学工作者们在蛋白质组分离鉴定中在定性分析领域取得的进展，包括：高丰度蛋白质去除、低丰度蛋白质富集、建立蛋白质分离鉴定平台、液质联用高灵敏度鉴定等方面;尤其是在2010年取得了很多新进展。比如：发展了一种通用型肽段富集材料，制备了表面固定铜离子的介孔磁性硅胶微球，可显著提高肽段的鉴定灵敏度。发展了两种方法，包括：提高分离鉴定通量的激光辅助酶解技术，磷酸化肽数据处理方法。建立了三个平台，比如：在发展高效快速蛋白质分离鉴定平台方面，建立了蛋白质多维分离-溶剂置换-在线酶解-多肽分离-质谱鉴定的高通量平台用于鼠脑蛋白质组鉴定，21 小时内鉴定出2014种蛋白质，分析通量与国际领先水平相当。还发展了高通量阵列蛋白质分离鉴定平台;建立了规模化磷酸化蛋白质组分离鉴定平台等。

　　接下来，张院士介绍了中国和全球科学家们在蛋白质组学研究中面临的新挑战。从全球蛋白质组学发展的前一阶段里看，中国承担了整个人类蛋白质组学计划中的人类肝脏蛋白质组学全谱分析任务，目前可达到每年鉴定12000 个唯一蛋白(unique protein)的水平，处于国际领先地位。

　　蛋白质组学定量的新技术新方法

　　蛋白质组学在定量新技术新方法中，已经出现的包括：非标记绝对定量，如归一化定量、SRM/MRM定量;稳定同位素标记相对定量，如iCAT、iTRAQ、AACT/SILAC定量;化学衍生标记，如乙酰化/ICPL化学修饰定量、DIGE荧光标记定量等，近10年来这些定量方法均发表了大量文献，比如：酵母蛋白质组的SILAC质谱定量;化学衍生标记质谱相对定量;还有中国科学家们发表的如：O18串联酶促标记糖位点定量新方法;应用于血浆蛋白质组的基于多维色谱分离的蛋白质定量新方法;肝脏蛋白荧光标记蛋白质定量新方法;以稀土元素为质量标签的定量蛋白质组新方法等。当前最值得关注的定量方法是SRM/MRM定量技术以及SRM/MRM和其它方法结合的定量技术，最近文献对比(Natrue Biotech 2010, 78, 710-721)表明，LC-MS MRM分析策略选择性、动态范围、重复性好，定量具有明显优势。比如Nature(Nature 2009,460, 762-766.)曾介绍了一种组合定量方法，综合运用等电聚焦+液相色谱两维高效分离、MRM和质谱计数双重定量，应用于勾端螺旋体，实现了相当于83%总蛋白数的蛋白定量。

　　国外目前已经发展了以Matties Mann、Matties Ulan、Redi Aebersold、John Bergeron等主流科学家参与的染色体蛋白质组计划，采用质谱为主要手段的 MRM定量技术，来建立人类基因—蛋白质—特异肽的特异肽段组数据库。中国科学家们也亟待探索和建立更多的蛋白质组学定量新技术新方法，包括利用新型分离介质、多维分离技术的高效分离手段;通过样品富集、提高仪器灵敏度来实现的高灵敏度检测;以及建立高精度定量的新方法等。

安捷伦UHPLC改善色谱分析的数据质量

　　安捷伦科技(中国)有限公司肖尧先生作了题为《安捷伦UHPLC改善色谱分析的数据质量》的报告，主要介绍了UHPLC改善色谱分析通量和分离度，UHPLC与HPLC之间的方法转换等内容。

安捷伦科技(中国)有限公司肖尧先生

　　小颗粒色谱填料

　　对于小颗粒色谱填料，需要高流速获得高柱效和分离速度，提高流速HETP不会提高，提高分离速度的同时改善分离度。颗粒度越小，HETP越低，柱效越高，分离度越好。

　　小颗粒填料全面改善液相色谱的数据质量：1)小颗粒高效柱，分离度改善，灵敏度改善(对于质谱可能尤其显著)，分离速度改善(使用小颗粒填料的短柱);2)提高流速对小颗粒填料色谱柱的柱效负面影响不大。

　　Agilent 1200 UHPLC性能特点

　　全新Agilent 1200 Infinity 系列高分离度快速液相色谱系统，更高的数据质量——速度、分离度和灵敏度。提高样品通量，试验时间缩短，分析速度可以比标准液相快20倍;使用小颗粒填料色谱柱，调整流动相选择性，分离度提高60%;采用质谱检测器，增加信噪比，灵敏度提高10倍以上。

　　而后，肖先生给大家举了UHPLC测定西洋参中皂苷的含量，异丙酸梯度分离甘油三酸脂等诸多实例，均获得很好的结果质量。

　　UHPLC与HPLC方法转换

　　UHPLC与HPLC之间的方法转换基于公式与计算器计算转换参数，其中流动相、柱温和检测波长是不变参数，而梯度时间表和进样量是转换参数，梯度时间基于柱长和流速。肖先生以柴胡样品为例，从HPLC直接转换的UHPLC方法满足了药典的分离要求。UHPLC与HPLC的方法比较见下表：

	原始HPLC	转换UHPLC
色谱柱	Zorbax Plus C18(4.6×250mm,5μm)	Zorbax Plus C18(2.1×100mm,1.8μm)
流速	1mL/min	0.4mL/min
运行时间	61min	13min
最大压力	110bar	506bar
溶剂消耗	61mL	5.2mL
进样量	20μL	1.6μL

岛津超快速液相色谱仪LC-30A性能特点及最新应用

　　岛津公司冀峰博士作了题为《岛津超快速液相色谱仪LC-30A性能特点及最新应用》的报告，主要介绍了Nexera UHPLC LC-30A 超高效液相色谱仪的超高压、超高速和超高温等三大优越性能及其应用。

岛津公司冀峰博士

　　Nexera(LC-30A)作为岛津LC的新一代产品，各方面的性能都提升到新的水平，可同时满足传统/快速/超快速/高分离度/高温多种分析条件的要求。

　　LC-30A优越性能

　　Nexera UHPLC LC-30A超高效液相色谱仪在压力高达130MPa时仍能被优化工作，而不影响高性能和数据质量。Nexera在最高的压力下还可进行宽流速范围的各种分析，从微柱液相(micro LC)到常规液相，从普通压力液相到超高压液相，从等梯度到四元高压梯度和多维液相。

　　LC-30A仅需10秒的快速进样，使快速色谱缩短了周期时间，真正实现了超过4600个样品容量的高通量。Nexera新设计的进样口和细尖(fine-tipped)的进样针还有额外的功能，如多个清洗溶剂的选择，进样口及针内壁的清洗，使交叉污染减少到最低。

　　LC-30A对于高温液相色谱分析提供了有效的溶剂预加热方式，使溶剂达到稳定可靠的状态。先进的智能加热平衡器(IHB)通过使用柱箱内独立控制的加热区域，使高温分析时的峰展宽效应最小，以保证任何流速下的柱温。当分析温度高达150℃时，柱后冷却器可以降低检测噪音。

　　接着，冀博士列举了分析人参皂苷、17种氨基酸混合标准品等诸多例子。

　　绿色液相色谱

　　绿色液相色谱一般是指减少有机溶剂的使用和消耗，通过缩短分析时间、降低有机溶剂的使用比例来实现。在高温下，水(亚临界水)的洗脱能力可以达到常规温度时有水/有机溶剂的洗脱能力。

　　LC-30A是一款低碳产品，它在降低环境压力方面主要体现在：1)节省溶剂，流速和分析时间分别缩减到原来的3/5和1/25，即每次分析的流动相消耗约减少到1/40。2)能源成本，分析时间减少为原来的1/25，即能源消耗减少到原来的1/25。3)性能成本，不仅速度快14倍，而且提高峰分离度，即成本/性能比降至1/14以下。4)方法移植的成本降低，可以使用方法移植(常规LC←→超高速LC)工具。5)高温下纯水流动相分析，降低了环境压力。

食品安全科技的发展：从化学分析家到分析毒理学家

　　中国疾病预防控制中心吴永宁研究员作了题为《食品安全科技的发展：从化学分析家到分析毒理学家》的报告，以三聚氰胺事件和南京小龙虾事件为例，介绍了化学污染分析和毒理学分析以及食品安全的风险监测和评估。

中国疾病预防控制中心吴永宁研究员

　　三聚氰胺事件

　　提及食品安全，吴研究员首先就讲到了“三聚氰胺奶粉”事件。这次事件曾对我国奶牛业造成了毁灭性打击，震惊了全国，惊动了世界。关于三聚氰胺的检测，因为之前美国类似的宠物肾结石事件中检测结果是三聚氰胺和三聚氰酸，所以当吴永宁研究员团队仅检测到三聚氰胺时，相当多的人都在质疑结果。但是从他们对市场上样品、患者家的奶粉以及公安部收缴的非法添加原料的检测中发现，其他物质的含量都很低，三聚氰胺确实是始作俑者。后来，经过大量测定数据和方法的公布，证明他们是正确的;特别是欧盟组织的国际比对中以优秀成绩通过了三聚氰胺分析能力的考核。

　　南京小龙虾事件

　　接下来，吴研究员给我们讲起了今年发生在南京的小龙虾事件。食用小龙虾后的横纹溶解综合征患者，具有与“哈夫”病相似的流行病学特征和临床表现，如病前4到13小时内均有食用较多小龙虾史。吴研究员对来自南京市场的小龙虾及患者的血液和尿液样品进行了900多项有关化学物质的筛查，做了6种聚醚类抗生素、10种大环内脂抗生素、23种β-受体激动剂、15种镇静剂、3种苯胺和消极苯胺类化合物，2种重金属的检测，未发现市场采集的小龙虾中存在已知可致横纹溶解综合征的化学物质。

　　国家疾控中心把所有轻度小龙虾病人的血液重新采集，然后，在国际合作当中，相互发现有什么样的生物物质。同时我们正在提出病例的定义和主动监测方案。明年将会更多的进行病例的主动搜索，主动去寻找这些病人。中国食品安全的一种状态就是，如果积累的病例多了，那么可能发现解决这个难题的机会就多了。

　　食品安全风险评估

　　最后，吴研究员介绍了食品安全风险体系。食品安全是指将风险降到人们普遍可以接受的程度，真正目的是控制食源性疾病。食品业无法避免风险，如何对风险进行评估就成为问题的重中之重。

　　我国去年出台的《中华人民共和国食品安全法》，其最大亮点就是将食品安全保障建立在风险分析的框架上，将以科学为基础的食品安全风险评估与以政策为基础的食品安全风险管理分离。“食品安全是建立在风险分析体系上的，包括风险评估、风险管理和风险交流。国际上食品安全管理是由联合国粮食与农业组织(FAO)/世界卫生组织(WHO)食品标准规划—国际食品法典委员会(CAC)实施的。我国也是这样，在实施新的《食品安全法》时，风险评估和风险管理也保持了独立性，由卫生部负责组建了代表科学的国家食品安全风险评估委员会和代表管理的食品安全国家标准审评委员会。这样看来，我们国家的食品安全风险监测与风险评估制度已经与国际接轨了。

用微流控和金纳米颗粒的微型化快速检测

　　国家纳米科学中心蒋兴宇研究员作了题为《用微流控和金纳米颗粒的微型化快速检测》的报告，主要介绍了微流控免疫印迹检测及其在人类免疫缺陷病毒(HIV)检测方面的应用。

国家纳米科学中心蒋兴宇研究员

　　流控免疫印迹检测

　　流控免疫印迹检测实验分为电泳、转膜和微流管道检测三个步骤。一个微流管道仅有150μm宽，载玻片有2㎝宽，每个管道中通入不同的抗体溶液，仅需1～3μL抗体溶液就可以同时检测细胞中多种蛋白的表达量。在一个微管道中通入几种分子量不同的管家基因表达蛋白的抗体的混合溶液，能够提供蛋白质翻译后修饰的信息，并能排除假阳性信号，而且分子量标准和目标蛋白在同一张结果图上。

　　微流控免疫印迹与传统免疫印迹比较

　　传统免疫印迹一次实验只能检测到一种蛋白的表达量，消耗大量抗体溶液(mL量级);而微流控免疫印迹可以同时检测细胞中多种蛋白的表达量，成本低，速度快，两者灵敏度相同。具体比较见下表：

	传统免疫印迹	微流控免疫印迹
单次实验可检测蛋白数	1种	≥10种
检测一种蛋白消耗抗体溶液体积	约1mL	约1μL
检测一种蛋白所需抗体成本	约20元	约0.2元
检测一种蛋白所需细胞全蛋白质量	约100μg	约4μg
免疫反应时间	约1h	约30min

　　微流控免疫印迹的应用

　　艾滋病无法根除和治愈，而且没有有效疫苗，因此，检测是预防的主要手段。检测人类免疫缺陷病毒(HIV)的现有方法是：

	速度	准确度	成本
初筛——酶联免疫试纸条	快	低——假阳性率高	低
确认——免疫印迹	慢	高	高

　　基于微流控的艾滋病检测试剂盒初筛和确认一步完成。同时检测33个抗原和33个血清样品，检测时间在半小时以内(常规检测同样的量至少需要3日)，所用样品量是传统免疫的1/100～1/1000，成本可以降低到小于1元/人次，通过检测荧光信号定量。

新型电雾式检测器Corona CAD Ultra

　　戴安中国有限公司资深液相色谱技术专家李浪先生作了题为《新型电雾式检测器Corona CAD Ultra》的报告，主要介绍了Corona CAD Ultra的工作原理、技术特点及其与其它检测器的比较。

戴安中国有限公司资深液相色谱技术专家李浪先生

　　Corona CAD(Charged Aerosol Detectors)是ESA公司(2009年底被戴安公司收购)独特的ZL技术，曾获得R&D100最佳新产品奖;是近期发展最快、被采纳速度也最快的HPLC通用型检测技术之一。

　　Corona CAD Ultra工作原理

　　Corona CAD Ultra的工作原理一般包括雾化、蒸发、颗粒带电和颗粒的检测四个过程。雾化过程是指从液相色谱柱过来的流动相进入仪器并在这里用气体雾化(通常是氮气)，然后直接喷雾到一个碰撞室，除去大的液滴，系统的气体流速大约是4L/min;蒸发过程是指剩下的流动相在往下通过干燥管时被蒸发，产生均一大小的颗粒;颗粒带电过程是指与此同时的另一路氮气流被一个电雾充电的高电压带上电，下一步被分析物颗粒与离子化的气体在一个混合腔里碰撞，这样电荷就被转移到样品的颗粒上。颗粒检测过程是指在通过一个离子陷阱之后过量的离子化气体被除去而带电颗粒挤入收集器，然后电荷被转移并被一个灵敏的静电计检测。

　　Corona CAD Ultra技术特点

　　Corona CAD Ultra采用一些新技术，在性能上体现诸多优点：1)极佳的灵敏度，柱上pg级的检测，质量敏感型通常比ELSD和低波长紫外要好。2)更加一致的响应值，独立于化学结构的响应，在缺乏标样时可作为相对测定。3)更宽的动态范围，四个数量级，从pg级到μg级，相当于在同一针进样的情况下，把<0.05%含量的杂质与主成份一起测定。4)广泛的应用领域，可用于食品饮料分析、环境分析、化学品分析和制药研发及分析领域，需要被分析物不挥发，但不需要紫外吸收或能离子化。5)即使在低浓度时也有很好的重现性。

　　CAD与RI及ELSD的比较

　　RI示差检测器灵敏度低，需要较大体积的进样，样品在柱上过载，分离度变差并且峰扩散，不能作梯度;ELSD蒸发光散射检测器非线性，低浓度时灵敏度较低，明显低估了二聚体的含量;CAD电雾式检测器灵敏度更高，比ELSD线性程度更好，动态范围更宽，对二聚体的估值稍高，是紫外检测器的一种有力补充。

　　最后，李专家举了一个CAD的应用实例，检测Amikacin(氨基羟丁基卡那霉素A，即抗菌素BBK8)不纯物及其降解产物。操作方法简单，结果令人满意。

环境有毒有害物质的生物化学研究

　　香港浸会大学化学系蔡宗苇教授作了题为《环境有毒有害物质的生物化学研究》的报告，主要介绍了二恶英的生成及其在生物体的毒性研究。

香港浸会大学化学系蔡宗苇教授

　　环境中由人类合成或由生产过程产生的有害化学物质越来越多,其中不少物质(如二恶英等环境荷尔蒙类物质) 对人体和生物具有强烈的毒性,甚至影响人类和生物的生育、遗传。因此,世界各国把对二恶英以及环境中荷尔蒙类物质的研究列为环境科学的前沿课题,初步调查结果表明,我国也存在着造成二恶英污染的潜在危险。

　　二恶英的产生

　　二恶英是指含有2个或1个氧键连结2个苯环的含氯有机化合物。由2个氧原子联结2个被氯原子取代的苯环为多氯二苯并二恶英(PCDDs);由1个氧原子联结2个被氯原子取代的苯环为多氯二苯并呋喃(PCDFs)。每个苯环上都可以取代1～4个氯原子，从而形成众多的异构体，其中PCDDs有75种异构体，PCDFs有135种异构体。其毒性比氰化钠要高50-100倍，比砒霜高900倍。

　　二恶英主要是在一系列包括熔炼、纸浆的漂白以及生产某些除草剂和杀虫剂的工业生产过程中所产生的有害的副产品，但也可能在火山爆发和森林火灾等自然过程中产生，它同时还包括在生产氯代有机物的热过程中所形成的有害的副产品。此外，汽车尾气和香烟燃烧都可以产生二恶英，甚至在我们日常生活用品，如洗洁精、牙膏等含有及其微量的二恶英。

　　二恶英的危害

　　二恶英进入人体的途径主要有呼吸道、皮肤和消化道。它能够导致严重的皮肤损伤性疾病，具有强烈的致癌、致畸作用，同时还具有生殖毒性、免疫毒性和内分泌毒性。如果人体短时间暴露于较高浓度的二恶英中，就有可能会导致皮肤的损伤如出现氯痤疮及皮肤黑斑，还出现肝功能的改变。如果长期暴露则会对免疫系统、发育中的神经系统、内分泌系统和生殖功能造成损害。研究表明，暴露于高浓度的二恶英环境下的工人其癌症死亡率比普通人群高60个百分点。

色谱分离材料的科学与艺术

　　博纳艾杰尔科技有限公司市场部经理杨定忠先生作了题为《色谱分离材料的科学与艺术》的报告，主要介绍了硅胶表面处理技术、新型酰胺键合硅胶色谱柱和Optimix技术等内容。

博纳艾杰尔科技有限公司杨定忠经理

　　硅胶表面处理技术

　　键合硅胶表面处理包括表面杂化和双层表面处理，表面杂化可以减少硅醇基并提高硅胶在碱性流动相中的稳定性，双层表面处理能够降低表面硅羟基酸性而提高硅胶表面的均一性。双层表面处理后，硅胶表面金属被新的表面硅羟基层覆盖屏蔽，表面强酸性硅羟基被新的低酸性硅羟基覆盖屏蔽，硅胶微晶形成过程中的不规则表面被新增的更均匀的表面层覆盖。因此，双层表面处理硅胶对极性化合物具有更好的保留和分离，更好的峰型和重现性。

　　基于双层表面处理技术的产品有Venusil MP C18、Venusil ASB C18,C8和Venusil HILIC。Venusil MP C18适合绝大多数应用的通用型反相色谱柱，对碱性化合物具有良好的分离和峰型;Venusil ASB C18,C8适用100%水流动相条件，在酸性条件下优异的键合相稳定性，高灵敏度(使用MSD)，极低pH条件下非常稳定(pH=0.8，100℃);Venusil HILIC在HILIC模式下，对亲水性化合物具有良好的保留，比氨基柱更稳定和更好的重现性。接着，杨经理举了一个用上面三种柱子对井岗霉素杂质分析的例子。

　　Optimix技术——全新的色谱方法开发/优化选择

　　Optimix技术成功地解决了同时分离强极性和强流水性化合物的难题，尤其在等度条件下的分离;解决了可离子化化合物分离需要添加高浓度盐的问题，拓宽了LC-MS的适用范围。

　　Optimix技术色谱柱表面均匀，由于没有空间位阻影响故在分离过程中分子具有更好的渗透性，与单层烷基型固定相相比具有独特的选择性。Optimix C18/SCX，C18和SCX阳离子互换基团混淆化学键合多孔硅胶固定相色谱柱。与纯真的C18或SCX色谱柱相比，C18/SCX具备C18和SCX的双重选择性;对于强碱性可解离化合物保留更加均衡，具备适中的保留、优秀的选择性和良好的峰形。

　　最后，杨经理概述了色谱方法优化新策略，并举了一个利用C18/SCX对除草剂优化分离的例子。

　　赞助厂商

　　2010北京色谱年会得到了安捷伦公司、岛津公司、博纳艾杰尔公司、戴安公司、北京绿绵科技公司、时联特种溶剂股份公司、北京普立泰克公司、PE公司等近二十家厂商的鼎力支持，他们不仅作了精彩报告，而且在展厅里布了展台，介绍他们的新技术、新产品。参展厂商如下：