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纯化全长／高纯度蛋白方法（Doubletag）

Double-tag在蛋白纯化过程中的应用Protein表达是一个非常复杂的过程，因此很难预测表达的蛋白是否是可溶性的、包涵体形式还是部分降解的。为了预防各种可能的困难条件，在重组蛋白上导入两种Tag可以提供获得高纯度均质蛋白的灵活性。蛋白含有两种不同亲和纯化Tag的重要原因：纯化全长的蛋白获得最高纯化的蛋白适合变性或生理条件下纯化优化的操作过程，可以直接从培养基中纯化蛋白与Strep-tag®配合最有效的是6xHistidine-tag，总之推荐一个Tag在蛋白的N-端，另外一个Tag在蛋白的C-端。纯化全长蛋白：重组的蛋白在表达时会有部分降解，即使在下游的处理过程中加入蛋白酶抑制剂也无法避免。可溶性降解蛋白仍然带有纯化tag，在纯化时会引起纯化蛋白的不纯（由于有不同长度片段的蛋白混入）。这种问题可以通过在蛋白的另一端加入第二种Tag来解决。经过第二种Tag的纯化，即可获得全长的蛋白。最高纯度的蛋白：在生理条件......阅读全文