2.3μmODS色谱柱及在中药分析中的应用

图1.  Knox曲线的比较。Column：TSKgel ODS-140HTP 2.3μm (2.0mmI.D.×5cm)；Sub-2μm ODS columns  (2.1mmI.D.×5.0cm)；Eluent：H2O/CH3CN=50/50 Detection: UV (254nm) Temp.：25℃；Inj. vol.： 2μl；Sample：Naphthalene。

一种新型可应用于高通量HPLC分析的 亚3微米ODS柱－TSKgel ODS-140HTP2.3μm被成功开发。本实验考察了该种填料的基本性质和梯度下的色谱行为，并将该柱应用于中药样品的高通量分析，取得良好的效果。

实验部分

仪器和主要试剂

ACQUITY UPLC （美国Waters），HLC 8020高效液相色谱仪（日本Tosoh），甲醇（德国Merck），乙腈（德国Merck），其它试剂均为AR级。

图2.  不同流速下柱压和柱效的比较。Column：TSKgel ODS-140HTP 2.3μm (2.0mmI.D.×10cm) ；Eluent：H2O/CH3CN =50/50   detection：UV (254nm) ；Temp.：25℃；Inj. vol. ：2μl ；Samples：1. Uracil,2. Benzene,3. Toluene,4. Naphthalene。

色谱条件

色谱柱：TSKgel ODS-140HTP 2.3μm (2.1 mmI.D. × 5 or 10 cm)、TSKgel ODS-100V 3μm (4.6 mmI.D. × 15 cm)、Acquity BEH C18 (2.1 mmI.D. × 5 cm or 10 cm)、Zorbax Eclipse C18 (2.1 mmI.D. × 5 cm or 10 cm)、Hypersil Gold C18 (2.1 mmI.D. × 5 cm)。

图3.  不同流速下柱压的比较。Column: TSKgel ODS-140HTP 2.3μm (2.0mmI.D.×5cm); Sub-2μm ODS columns (2.1mmI.D.×5.0cm); Eluent: H2O/CH3CN=50/50 Detection: UV (254nm) Temp. : 25℃；Inj. vol.: 2μl Sample: Naphthalene.

结果与讨论

基本性质考察

图4.  连续梯度运行下柱效变化。Column：TSKgel ODS-140HTP 2.3μm (2.1mmI.D.×10cm); Eluent: （A）H2O/MeOH（90/10）, （B） H2O/MeOH（50/50）,（C） MeOH; Flow rate: 0.6ml/min; Temp.: 25℃;Step gradient：A→B→C　（for 5min each step，30min interval；Press.：（A） 45MPa，（B） 59MPa，（C）32MPa 。

实验比较了TSKgel ODS-140HTP 2.3μm色谱柱和3种亚2微米ODS色谱柱的Knox曲线，结果见图1。实验结果表明，在考察线性流速范围内，TSKgel ODS-140HTP 2.3μm色谱柱和3种亚2微米色谱柱的Knox曲线非常近似，说明新型2.3μm的ODS填料的色谱柱其装填效果较好。在不同流速下对色谱柱柱效进行了考察，结果见图2。实验结果表明，该色谱柱在接近1 ml/min的流速下仍可保持较高的柱效，说明该柱可用于高流速下的快速分析。不同流速下的柱压变化的比较结果见图3，实验结果表明，在相同的流速条件下，TSKgel ODS-140HTP 2.3μm色谱柱的柱压降仅相当于亚2微米ODS柱的二分之一到三分之一。1100次梯度运行实验前后色谱柱的柱效变化情况见图4。实验结果表明，该色谱柱在高流速下具有良好的使用耐久性。

图5.白首乌的色谱图。

应用

采用10 cm柱长的TSKgel ODS-140HTP 2.3μm色谱柱对中药白首乌总提物样品进行分离实验，并在色谱柱上限压力下和相同的梯度体积的条件下与10 cm柱长的1.7μm ODS色谱柱进行了对比分离实验（图5，图6）。实验结果表明，TSKgel ODS-140HTP 2.3μm色谱柱可以在更快的流速和更低的柱压降的条件下进行中药样品的高通量分析。

图6.  压力变化曲线。Eluent: （A）H2O, （B）ACN; Gradient for 2.3μm Column: 0min（B 5%） →0.48 min （B 5%）→1.6 min（B 30%）→6.0 min（B 68%）→ 6.1 min（B 100%）→20min（B100%）, Column temperature 40℃. Gradient for 2.3μm Column: 0min（B 5%） →0.68 min（B 5%）→2.28 min（B 30%）→8.57min（B 68%）→ 8.70 min（B 100%）→20min（B100%）, Column temperature 40℃.

结论

新型2.3μm ODS色谱柱的装填性能良好。在相同流速下、相同柱长条件下，相比常规的5微米或3微米ODS柱，该柱在较宽的线性流速范围内均表现出很高的柱效；相比常规的亚2微米ODS柱，该柱在较宽的线性流速范围内柱压降较小，在乙腈/水的流动相体系下，该柱的柱压降仅为亚2微米的ODS柱1/2左右；在1.0ml/min的高流速下，色谱峰分离度未见有明显下降。实验结果表明，该种色谱柱除可配套用于超高压液相系统外，更可在常规HPLC系统压力下进行高通量HPLC分析。