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冷冻电镜结合Nanodisc在膜蛋白研究的应用（二）

将膜蛋白组装到 Nanodiscs 中主要有两种方法。第一：组装溶解在去污剂中的膜蛋白在去污剂存在条件下将膜蛋白纯化，然后再添加 MSPs 和磷脂。含有膜蛋白的 Nanodiscs 能够自发地组装，在去除掉表面活性剂后可以通过凝胶过滤（排阻层析）等方式来纯化。第二：Nanodiscs 与无细胞表达体系相结合，针对于一些特殊蛋白，例如带有毒性的蛋白可通过无细胞表达体系表达，通过加入已经预先组装的 Nanodiscs 使表达出的膜蛋白通过自组装镶嵌进去。图 3：膜蛋白与 Nanodisc 的两种组装机制（图片来源 Cube Biotech 官方网站）左图：膜蛋白（橙色）溶解在去污剂（深灰色）中并与冻干的 MSP（绿色）和磷脂（浅灰）混合。然后去除去污剂，形成蛋白-Nanodisc 复合物。右图：预组装了 MSP 与磷脂的 Nanodisc 加入到无细胞反应液（cell-free expression systems）中，新生的膜蛋白......阅读全文