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大肠杆菌中非天然氨基酸的整体掺入实验

实验材料 大肠杆菌菌株色氨酸类似物寡核苷酸引物试剂、试剂盒 结合缓冲液清洗缓冲液洗脱缓冲液仪器、耗材 Luria-Bartani 培养基Microcon 浓缩器实验步骤 下述方法包括：( 1 ) 大肠杆菌在色氨酸类似物中的生长。( 2 ) 含 fW 取代氨基酸的蛋白质的表达和纯化。( 3 ) 对非天然氨基酸进行深入水平的分析。3.1 大肠杆菌在非天然氨基酸（培养基）上的生长色氨酸类似物掺入大肠杆菌是直截了当的。因为色氨酰转移 RNA 合成酶没有编辑结构域，天然氨基酸与类似物的区分只是在结构上。枯草杆菌色氨酰转移 RNA 合成酶可以相对更有效地结合（装载）荧光化的色氨酸类似物；4 fW 的结合比 W 低 6 倍，而 5fW 的结合比 W 低 74 倍 [ 13 ]。与此类似，已经知道色氨酸类似物进入细胞，并在类似物的毒性起作用之前支持最少几代的生长。为了使色氨酸类似物有效掺入，使用带有防止生物合成的突变细菌菌株（见注 ......阅读全文