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细胞调亡的研究方法:用荧光激活的细胞分类仪

用荧光激活的细胞分类仪检测调亡细胞1)原位缺口翻译检测裂解的DNA片段1.取106经促调亡物质处理的细胞,用1% BSA-PBS洗涤细胞后加入0.1ml FITC标记的抗CD4或抗CD8单克隆抗体,4℃ 20分钟。用1% BSA-PBS洗涤细胞。置冰上。2.加入0.1ml 1%多聚甲醛,置冰上5分钟,加入60%(v/v)甲醇溶液,轻轻悬浮细胞,4℃固定细胞15分钟。4℃离心500×g 10分钟,去上清液。3.加入0.1ml 0.1% Triton X-100,4℃15分钟。用1% BSA-PBS洗涤细胞2次。加入50μl缺口翻译缓冲液(50mmol/L Tris-HCl pH7.4,5mmol/L MgCl2, 1.5U大肠杆菌DNA多聚酶I,50nmol/L 生物素-14-dUTP,50nmol/L dATP, 50nmol/L dGTP, 50nmol/L dCTP......阅读全文

微核实验在染色体水平检测DN A损伤实验

实验步骤 一、材料 1. 胞质分裂阻滞微核试验 2. 微核的着丝点检测 (1)从硬皮病 C R E S T 亚型的患者中取得的血清样本。 (2) F I T C 标记的兔抗人 I g G 二抗。 (3) 过氧化物酶

微核实验在染色体水平检测DNA损伤实验(一)

实验步骤一、材料1. 胞质分裂阻滞微核试验2. 微核的着丝点检测(1)从硬皮病 C R E S T 亚型的患者中取得的血清样本。(2) F I T C 标记的兔抗人 I g G 二抗。(3) 过氧化物酶标记的兔抗人 I g G 。(4) 二胺基联苯溶液(D A B ): I m g /m L 溶于