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Total RNA Isolation Guanidine-based isolation Objective: To obtain total RNA from zebrafish embryos. Required Materials Denaturing Solution or Solution "D" 2 M NaOAC pH 4 Phenol, H2O saturated 49:1 Chloroform/Isoamyl alcohol Isoproponal 75% EtOH DEPC-treated H2O or freshly deionized formamide 1 mL syringe 20 gauge needle 1.5mL microcentrifuge tubes microcentrifug......阅读全文
在当今社会，腰痛（LBP）患者数量庞大，LBP患者也因此饱受病痛折磨，椎间盘退变（IDD）作为LBP的最主要病因，其发病机制十分复杂，目前已知的就有基因、年龄和包括职业因素、吸烟、酗酒在内的一些不良生活习惯等因素。据统计，作为腰痛的主要病因的IDD疾病一年会给全球的经济造成超过700亿欧元的损失
锤头型核酶实验 发夹型核酶实验 其他类型的核酶 实验方法原理 锤头型核酶是最简
核酶（ribozyme ) 是一类具有酶特性的 RNA 分子，通过催化靶位点 RNA 链中磷酸二酯键的断裂，特异性地剪切底物 RNA 分子，从而阻断基因的表达。核酶广泛存在于从低等到高等的多种生物中，参细胞内 RNA 及其前体的加工和成熟过程。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法
实验方法原理 锤头型核酶是最简单的一类核酶，而且其靶序列也比较简单。锤头型核酶发现于几种植物病毒的卫星 RNA、一种类病毒 RNA 和蝾螈核卫星 DNA 的转录产物中。它催化一些类病毒 RNA 和一些与类病毒 RNA 相似的只复制产物的不可逆自我剪切„实验材料 ATPT4多核苷酸激酶RNasinDT
专题一：RNA干扰技术（RNAi）1995年，康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现，反义和正义RNA都阻断了基因的表达，他们对这个结果百思不得其解。直到1998年， Andrew Fire的研究证明，在正义RNA也阻断了基因表达的试验中，真正起作用的是双链RNA。这些
环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种新兴的内源性非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA)，是继microRNA (miRNA)以及long noncoding RNA (IncRNA)后非编码RNA家族中极具研究潜力的新成员。越来越多的研究表明，环状RNA具
Jack Szostak正在调配地球早期起源生命的那一碗“原始肉汤” Jack Szostak正一步一个脚印、坚实地朝着自己的科研目标前进，他要在自己的实验室里人工合成出一个活细胞。 Jack Szostak知道他也许永远也实现不了他的终极科学梦想了。然而，用英国剑桥医学研究所分子生物学
1995年，康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现，反义和正义RNA都阻断了基因的表达，他们对这个结果百思不得其解。直到1998年， Andrew Fire的研究证明，在正义RNA也阻断了基因表达的试验中，真正起作用的是双链RNA[1]。这些双链RNA是体外
（一）实验程序如不谨慎操作，外源性RNA酶可以通过下述途径污染RNA制品：（１）玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA〈, /SPAN〉酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染，使用前必须于180℃干烤８小时或更
在任何教科书的简图中，一组红血细胞、皮肤细胞或神经细胞，通常大小都是相同的。但是，正如没有哪两个人的身高和体重是完全相同，在一个真正的细胞群体中，细胞的尺寸是有大有小的。 最近，宾夕法尼亚大学的一个研究小组表明，在大多数细胞染色体中的核DNA的两个拷贝，可以使细胞具有任何的尺寸大小。相关研究结
为了获得高质量的真核细胞mRNA， 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注
为了获得高质量的真核细胞mRNA， 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注
所有RNA病毒都通过与正常运输细胞RNA转录本不同的过程将其基因组传递到目标宿主细胞中。来自正常的细胞RNA转录的运输。病毒RNA的传递最多。进入大多数细胞的病毒DNA的运输因此触发了先天的抗病毒防御机制，将病毒RNA识别为异物。反过来，病毒已经进化出了破坏这些防御的机制，让它们在其中茁壮成长。
1、体积、电导和激光散射原理这是Beckman－Coulter 公司生产的血液分析仪所采用的经典分析方法，他集三种物理学检测技术于一体，在细胞处于自然原始的状态下对其进行多参数分析。该方法也称为体积、电导、激光散射血细胞分析法。此技术采用在标本中首先加入红细胞溶血剂溶解掉红细胞，然后加入稳定剂来中
环状RNA作为研究持续火热的明星分子，不同于对其丰富的表达谱研究，环状RNA功能机制研究还仅仅处在起步阶段。环状RNA研究多为miRNA海绵机制，部分circRNA可竞争性结合miRNA，解除miRNA对靶基因的抑制作用，上调靶基因的表达。其实，环状RNA可以通过结合不同种类的功能蛋白，分别在转
RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单
内含子（intron）的存在，是真核细胞蛋白质编码基因与原核细胞最大的区别。在真核细胞基因表达的过程中，需要经过RNA剪接反应将其去除。一般来说，内含子的长度远比编码蛋白的外显子序列长，并且执行剪接反应的酶——剪接体高度复杂，由170多个相关蛋白组成。剪接反应需要高度精准，移码错位一个碱基都会导
RNA是基因表达产物，由以下几类分子组成，rRNA（占细胞总RNA的80%～85%）、tRNA和核内小分子RNA（占10～15%）、mRNA（占1～5%）。其中mRNA是分子生物学的主要研究对象，分离制备mRNA是克隆基因，分析基因表达以及建立cDNA文库的首要步骤。真核细胞总RNA分离提取的目的是
能够准确地修复自发的错误、氧化或诱变剂导致的DNA损伤对于细胞生存至关重要。这种修复通常是利用完全相同或同源的完整DNA序列来实现。但科学家们现在证实，在一种常见芽殖酵母细胞内RNA可充当模板用来修复破坏性最大的DNA损伤——DNA双链断裂。 尽管较早的研究表明了将RNA寡核苷酸导入到细胞中可
摘要：流式细胞仪(flow cytometer，FCM)是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。在医学研究领域中，流式细胞仪能够快速分析单个细胞的多种特性，它既可以定性也可以定量，适于大量标本的检测。
外源基因在原核细胞中表达是基因工程操作中最初取得成功的途径。1 原核生物基因表达的特点同所有的生命过程一样，外源基因在原核细胞中的表达包括两个主要过程:即 DNA转录成mRNA和 mRNA翻译成蛋白质。与真核细胞相比，原核细胞的表达有以下特点:①原核生物只有一种RNA 聚合酶(真核细胞有三种)识别原
当Philip Bevilacqua决定研究一个活体植物细胞中所有核糖核酸（RNA）分子的形态时，他面临两个问题：首先，自从中学时代起，他就没有研究过与植物相关的生物学；其次，生物化学家倾向于检测单个RNA分子，因为处理一个细胞内的众多RNA分子是个更加棘手的挑战。 Bevilacqua是美国
当Philip Bevilacqua决定研究一个活体植物细胞中所有核糖核酸（RNA）分子的形态时，他面临两个问题：首先，自从中学时代起，他就没有研究过与植物相关的生物学；其次，生物化学家倾向于检测单个RNA分子，因为处理一个细胞内的众多RNA分子是个更加棘手的挑战。 Bevilacqua是美国
包括Northern杂交在内的许多分子生物学实验均是以RNA为材料，mRNA的制备也需要一定质量的总RNA样品，RNA的数量、纯度与完整性将直接影响这些实验的结果。RNA中rRNA的数量最多，占总量的80%～85%；tRNA及核内小分子RNA占15%～20%；mRNA仅占1%～5%。由于各种rRNA
RNA适配体是一种短RNA，可通过结合细胞内的分子或蛋白质调节细胞内进程。尽管RNA适配体具有潜在的应用价值，但它并没有其他RNA技术广泛应用，主要问题是它们不能高浓度表达，从而不能有效调节蛋白质功能，同时也阻碍了RNA装置，例如RNA代谢物生物传感器在哺乳动物细胞中的应用。通常，基于RNA的生
分离与纯化对象之一：“亚细胞（细胞器）”的构造与功能 上世纪20年代以Svedberg为首的欧洲科学家艰难研制的超速离心机原型主要目的是想分离和纯化病毒、细胞和亚细胞构造（细胞器），然而50年代中期开始生产的*代及以后的各代超速离心机，在很长
RNA甲基化领域是当前最耀眼的国际科研明星，也是国自然申请的大热点；究其原因，是因为最近一两年，RNA甲基化的功能与分子机制方面取得了巨大的进展。RNA甲基化已被证实在癌症发生发展，病毒感染，神经发育，干细胞分化等过程中发挥着关键作用。今天，我们承接上一期的癌症篇，为您带来病毒领域的RNA甲基化
凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）可以：（1）研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用；（2）可用于DNA定性和定量分析；（3）用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。实验方法原理一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初
实验概要本实验介绍了从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序，该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这种裂解细胞的方法（在SDS存在的条件下用蛋白酶K消化)去消化组织速度很慢，导致内源性RNA酶在被蛋
哺乳动物细胞总ＲＮＡ的分离细胞的裂解提取步骤注意事项 这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等（1980）所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这种裂解