WIKI资讯
WIKI资讯
实验步骤 一、机制 从 1971 年（Bernardi，1971;Gorbunoff，1990) 就已经幵始定期发表关于 HA 对蛋白质吸附与解吸附的综述。最近的一篇文献 (Kandorietal.，2004) 引用了较早阐述的机制，酸性蛋白质通过 C(钙)-位点结合, 而碱性蛋白质通过 P(磷酸盐)-位点结合。C-位点和 P-位点首先由 Kawasaki 等 (1986) 提出，随后 Gagnon(1996)Xt 其进一步探讨并强调了 C-位点在单克隆抗体纯化中的重要性: 部分单克隆抗体的结合是通过钙配位络合物 (calciumcoordinationcomplexe) 与抗体中的羧基簇（carboxylcluster) 发生作用。HA-蛋白质间的相互作用可简化为下述内容: 氨基可以吸附于 P-位点，但受到 C-位点的排斥; 对于羧基来......阅读全文
蛋白质纯化的层析技术中，凝胶过滤比较独特,它是基于蛋白质分子质量的相对大小而分离。与传统的过滤相反，通过凝胶过滤柱后,并没有任何蛋白质留存于其中。凝胶过滤优缺点明显;优点在于，脆性蛋白质与层析固定相结合并不会破坏其功能;缺点在于,和凝胶不结合则限制层析的分辨率。作者： 伯吉斯等,主译：陈薇，本实验来
操作采用分子筛层析获得的洗脱图谱如图 23.1 A 所 75。零 洗 脱 体 积 (zero elution volu m e ) 是指上样于层析固定相的样品体积。无法进入介质的分子的洗脱体积定义为无效体 积 V 。，它表示颗粒外部的体积。可以进人介质的分子的体积定义为总体积％, 它表示
实验步骤 操作 采用分子筛层析获得的洗脱图谱如图 23.1 A 所 75。零 洗 脱 体 积 (zero elution volu m e ) 是指上样于层析固定相的样品体积。无法进入介质的分子的洗脱体积定义为无效体 积 V
羟基磷灰石 (hydroxyapatite,HA) 是一种以磷酸钙为原料的羟基化物, 其大量地用于蛋白质的层析分离主要是在 1991?2009 年，并且最初只是用于重组蛋白的纯化。HA 的使用方法参照 Tiselius 等（1956) 的论述和 Gorbunoff(1985) 的综述。实验步骤一、机
离子交换层析在纯化蛋白质的层析手段中使用最为广泛。它对蛋白质的分辨率高，操作简易，重复性好，成本低。按照离子交换原理，蛋白质可从大量缓冲性溶液中被分离，所以此方法尤适于蛋白质粗提物的初始纯化。在分离蛋白质时，速度往往是很重要的。 如蛋白酶的初始分离和不稳定蛋白质的纯化。离子交換层析提供了很多加速分离
近年来中国生物工程杂志社(中国生物工程学会、中国生物技术发展中心、中国科学院文献情报中心主办)围绕蛋白质分离纯化与抗体制备、生物工程下游技术、蛋白组学技术与应用等主题多次成功举办了专题研讨班，受到了国内生物技术研发与产业界的普遍欢迎。应广大参会代表的要求，现定于2009年10月24-25日在北京
近年来中国生物工程杂志社(中国生物工程学会、中国生物技术发展中心、中国科学院文献情报中心主办)围绕蛋白质分离纯化与抗体制备、生物工程下游技术、蛋白组学技术与应用等主题多次成功举办了专题研讨班，受到了国内生物技术研发与产业界的普遍欢迎。应广大参会代表的要求，现定于2009年10月24~25日在北京
由于在自然界生命活动中起重要作用的蛋白质在机体细胞内的浓度比较低，并且存在于细胞的各个机构中的蛋白质几乎都是以复杂的混合形式存在的。为了在不破坏蛋白质的空间结构及一级结构，和不影响其生理功能的情况下，把蛋白质分离、纯化出来，需要使用一些技术，如重组蛋白纯化技术。疏水相互作用层析法是蛋白分离纯化的一种
由于在自然界生命活动中起重要作用的蛋白质在机体细胞内的浓度比较低，并且存在于细胞的各个机构中的蛋白质几乎都是以复杂的混合形式存在的。为了在不破坏蛋白质的空间结构及一级结构，和不影响其生理功能的情况下，把蛋白质分离、纯化出来，需要使用一些技术，如重组蛋白纯化技术。疏水相互作用层析法是蛋白分离纯化的一种
试剂、试剂盒：分离缓冲液 &nbs
4月24日，中科院过程工程所苏志国研究员主持完成的“多柱组合层析高通量蛋白质分离设备”重大科研装备研制项目通过中科院计划局组织的专家验收。 验收专家组成
实验方法原理 可进行离子交换的蛋白质在实验条件下必须有单一电荷。溶液中单一电荷的蛋白质可被离子交换树脂上的小离子置换（指与蛋白质末端离子的交换）；固定在树脂上。通过提高溶液中相反离子浓度或降低蛋白质所带电荷数等方法可将蛋白质从树脂上洗脱下来。利用此法，可根据不同蛋白质电荷性质不同而将其分离开来。若已
预计在新奇的一级分子和生物仿制药实体方面将会有突出的增长。一些进步的是改良的分析、开发和相互作用。现在已有许多用于去除關的方法，包括冻干、反向萃取、溶质析出，precipitation、透析(溶剂交换） 、超滤和层析技术。值得注意的是，在众多微和设备发展的支持下，小型化和高通量的蛋白质分析取得了极大
由中国生物工程杂志社（中国生物工程学会会刊）主办的第14期蛋白质分离纯化技术专题研讨班定于2012年8月11-12日在上海举行。本期研讨班课程综合了国内外最新的蛋白质分离纯化技术与方法，特别是广泛吸纳了历届参会代表的大量问题解答与反馈意见以及研发与产业中的实际应用需求，经权威专家的反复
蛋白质浓缩和溶质的去除实验 实验步骤 一、层
1.生物大分子的纯化凝胶过滤是依据分子量的不同来进行分离的，由于它的这一分离特性，以及它具有简单、方便、不改变样品生物学活性等优点，使得凝胶过滤成为分离纯化生物大分子的一种重要手段，尤其是对于一些大小不同，但理化性质相似的分子，用其它方法较难分开，而凝胶过滤无疑是一种合适的方法。例如对于不同聚合程度
试剂、试剂盒分离缓冲液增溶缓冲液洗脱缓冲液Laemmli 样品缓冲液胶段冲洗缓冲液酶解缓冲液肽抽提缓冲液实验步骤3.1 膜的分离因为在研磨材料时，要分离的膜组分以小囊泡形式与可溶的胞质蛋白质混合在一起，所以，最好在分离、鉴定膜蛋白前将这些胞质蛋白质去除掉。为了达到这个目的，我们需要用可穿透这些囊泡的
二、蛋白质的分离纯化蛋白质的分离纯化方法很多，主要有：（一）根据蛋白质溶解度不同的分离方法1、蛋白质的盐析 中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质溶
凝胶过滤层析是一项重要的蛋白质纯化技术，又称为大小排阻、凝胶排阻、分子筛或凝胶过滤层析这种方法利用分级分离，而不需要蛋白质的化学结合，这就明显降低了因不可逆结合所致的蛋白质损失和失活。另外，可利用此法更换蛋白质的缓冲液或降低缓冲液的离子强度。在蛋白质纯化操作中何时使用凝胶过滤，还不能一概而论，有时纯
（一）根据配体特异性的分离方法－亲和色谱法 亲和层析法（aflinity chromatography）是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体（Ligand）的分子能特异
一、层析在过去的 2 0 年中，蛋白质组学技术的日益广泛应用，使蛋白质浓缩和脱盐的层析技术得到不断革新。蛋白质组学通常需要从少量复杂的混合物中富集蛋白质，包括选择性地浓缩特定种类的蛋白质。由于质谱 (M S ) 和基于抗体检测技术的高灵敏度及可提供详细生化特征的性质，它们在临床诊断、
2、等电点沉淀法 蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小，因而溶解度也最小，各种蛋白质的等电点有差别，可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀，但此法很少单独使用，可与盐析法结合用。3、低温有机溶剂沉淀法 用与水可混溶的有机溶剂，甲醇，乙醇或丙酮，可使多数蛋白质溶解度降低并析出，此法分辨
2、等电点沉淀法 蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小，因而溶解度也最小，各种蛋白质的等电点有差别，可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀，但此法很少单独使用，可与盐析法结合用。 3、低温有机溶剂沉淀法 用与水可混溶的有机溶剂，甲醇，乙醇或丙酮，可使多数蛋白质溶解度降低并析出，此法分
是当代生物产业当中的核心技术。该技术难度、成本均高；例如一个生物药品的成本75%都花在下游蛋白质分离纯化当中。常用技术有： １、沉淀， ２、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。 ３、透析：利用透析袋把大分子
蛋白质的分离纯化方法很多，主要有：（一）根据蛋白质溶解度不同的分离方法1、蛋白质的盐析 中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子
离子交换层析法 实验方法原理 可进行离子交换的蛋白质在实验条件下必须有单一电荷。溶液中单一电荷的蛋
一、根据蛋白质溶解度不同的分离1、蛋白质的盐析法：中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析。2、等电点沉淀法：蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小，因而溶解度也最小，各
随着现代生物技术与生物产业的迅速发展，蛋白质分离纯化已成为现代生物工程的关键技术。应国内生物技术科研界与产业界的需求，中国生物工程杂志社(中国生物工程学会、中国生物技术发展中心、中国科学院文献情报中心主办)围绕蛋白质分离纯化与抗体制备、蛋白组学技术与应用举办了一系列的专题研讨班。本期研
一、原理1.葡聚糖凝胶SephadexG-200凝胶柱层析利用大分子不能进入凝胶颗粒内部最先流出柱外，而小分子物质进入凝胶颗粒内部，流速慢而最后流出柱外，凝胶层析法能将不同分子大小的物质分离开。（G-200能分离800-80000D分子量的蛋白质）2.利用离子交换法，选取DEAE-阴离子纤维素DE5
一，蛋白质（包括酶）的提取 大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。（一）水溶液提取法 稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1